如何高效DNA转染293细胞

293细胞(人胚肾细胞)系包括AAV293、HEK293、293T、293F等细胞株,是进行病毒包装和重组蛋白表达最为常用的工程细胞之一。特别是AAV293细胞,目前已成为腺相关病毒(AAV)包装最为理想的宿主细胞,而AAV是目前基因治疗的主要病毒载体之一。显然,293细胞的高效转染具有重大的应用价值,但目前无论国内国外,对293细胞的转染都还存在着效率偏低的问题。据报道,国外较为权威的DNA转染试剂对293细胞的转染阳性率一般在50-70%,而国内性能较好的DNA转染试剂对293细胞的转染阳性率一般为40-50%,显然远远满足不了DNA高效转染的要求。

如果要高效转染293细胞,建议最好按RFect 293细胞DNA转染试剂的说明操作。我们以AAV-293细胞铺板,使用24孔板,每孔接种2.5x105细胞,次日进行EGFP质粒转染(细胞汇合度约为90%),RFect 293转染试剂用量为2.5uL,EGFP质粒用量0.8ug,24小时后显微镜观察,293细胞的转染阳性率可高达95%以上,这个转染效率已经远远优于国际多家权威DNA转染试剂。

A 国际某权威品牌P
B RFect 293细胞DNA转染试剂
 C国内某品牌转染试剂H
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