想想单链DNA（single strand DNA）有啥用？猛的一想，可能大脑一片空白。而实际上，在诸如PCR引物，外显子测序中中捕获探针，RNA/DNA FISH中的杂交探针，Northern/Southern blot中的杂交探针，CRISPR/Cas9中的同源修复模板等等都需要ssDNA。当然，大部分情况下，直接进行化学合成是获取ssDNA最为快速高效的方式。但这种化学合成的策略同时面临着序列越长成本越高，重复序列越多越难合成的问题。因此，开发新的ssDNA，尤其是针对长ssDNA的合成方法显得尤为重要。以下我们将分享一些神奇的单链DNA合成技术。
今天介绍第一种，基于不对称PCR（asymmetric PCR）的单链DNA合成技术。
不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA (ssDNA)的方法。常规PCR中我们使用的正向和反向引物是等量的，因此扩增产生的两条ssDNA是等量的；如果只想获得其中一条ssDNA，则可以通过调整正反向引物的量实现。经过不对称PCR获得的是ssDNA和dsDNA的混合物，可以通过琼脂糖凝胶电泳进行分离纯化。
asymmetric PCR
