1.1 LB培养基
蒸馏水 950ml
胰蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
1.2 LB固体培养基
液体培养基 1L
琼脂粉 15g
1.2.1 LB液体培养基配制步骤
1.融化,加热,并不断用玻璃棒搅拌也可以借助磁力搅拌器进行搅拌处理。
2.用去离子水定容至1L。
3.在高压下蒸汽灭菌21min。
1.2.2 LB固体培养基加抗生素倒板
1.配制:1000mlLB培养基加入15g琼脂粉(琼脂粉品牌不一样差异很大,需要根据说明书添加)。
2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中,待培养基温度。降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。
3.倒板:一般15ml-20ml倒1个板子。培养基凝固后,打开盖子,超净台上吹15min,减少水汽产生。待平板彻底冷却后,用marker比标记上抗性和生产日期,放入冰箱低温保存。
4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。
1.3 SOB培养基1L
SOB培养基中含有两倍多蛋白胨,蛋白胨中富含氨基酸及多肽。另外,SOB培养基中含有镁离子,镁离子是高密度培养必须的离子。利用SOB培养基培养大肠杆菌在普通条件(250rpm)下摇瓶培养,菌浓可达到OD600 3-5左右,如果提高转速到350 rpm,OD600最高能够达到10-15。在SOB培养基中的大肠杆菌具有更高的转化效率,因此常用SOB培养基制备感受态细胞。
胰蛋白胨 20g
酵母粉 5g
NaCl 0.5g
KCl 0.186g
MgCl2 0.95g
琼脂粉 15g
1.3.1 SOB液体培养基配制步骤
1.摇动容器使溶质完全溶解
2.加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)
3.用5mol/L KOH 调pH值至7.2。用去离子水定容至1L
4.在121℃高压蒸汽灭菌20min
5.该溶液在使用前,加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2
[2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下:用90ml去离子水溶解19g MgCl2,用去离子水调整体积为100ml,在121℃高压下蒸汽灭菌20min]。
1.4 SOC培养基1L
用于制备高效率的大肠杆菌感受态细胞,也用于热激后感受态细胞的复苏。
胰蛋白胨 20g
酵母粉 5g
NaCl 0.5g
KCl 1.86g
MgCl2 0.95g
琼脂粉 15g
葡萄糖(D) 3.6g
1.4.1 SOC液体培养基配制
1.在分析天平上称取上表中的组分(葡萄糖除外),加950 mL去离子水溶解。
2.用 NaOH调节pH至7.5,定容至1 L。115度高压蒸汽灭菌20分钟 。
冷却至室温后,加入5 mL的1M葡萄糖溶液(预先配制,用0.22um滤膜过滤除菌)。
Tips:葡萄糖不能预先加入。在高温条件下,单糖类物质会与游离氨基酸、肽类发生美拉德反应,生产不溶性深褐色产物,微生物无法利用,且有害,降低培养基营养价值。对于使用量大的实验室,可以预先配制250mM KCl溶液和1M MgCl2溶液,配制培养基时量取10 mL溶液加入。
1.5 2*YT培养基
2×YT培养基配方:
胰蛋白胨 16g
酵母粉 10g
NaCl 5
琼脂粉 15g