大肠杆菌培养基配制

1.1 LB培养基

蒸馏水 950ml

胰蛋白胨 10g

酵母提取物 5g

氯化钠 10g

1.2 LB固体培养基 

液体培养基 1L

琼脂粉 15g

1.2.1 LB液体培养基配制步骤

1.融化,加热,并不断用玻璃棒搅拌也可以借助磁力搅拌器进行搅拌处理。

2.用去离子水定容至1L。

3.在高压下蒸汽灭菌21min。

1.2.2 LB固体培养基加抗生素倒板

1.配制:1000mlLB培养基加入15g琼脂粉(琼脂粉品牌不一样差异很大,需要根据说明书添加)。

2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中,待培养基温度。降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。

3.倒板:一般15ml-20ml倒1个板子。培养基凝固后,打开盖子,超净台上吹15min,减少水汽产生。待平板彻底冷却后,用marker比标记上抗性和生产日期,放入冰箱低温保存。

4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。

1.3 SOB培养基1L

SOB培养基中含有两倍多蛋白胨,蛋白胨中富含氨基酸及多肽。另外,SOB培养基中含有镁离子,镁离子是高密度培养必须的离子。利用SOB培养基培养大肠杆菌在普通条件(250rpm)下摇瓶培养,菌浓可达到OD600 3-5左右,如果提高转速到350 rpm,OD600最高能够达到10-15。在SOB培养基中的大肠杆菌具有更高的转化效率,因此常用SOB培养基制备感受态细胞。

胰蛋白胨 20g

酵母粉  5g

NaCl    0.5g

KCl    0.186g

MgCl2 0.95g

琼脂粉 15g

1.3.1 SOB液体培养基配制步骤

1.摇动容器使溶质完全溶解

2.加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)

3.用5mol/L KOH 调pH值至7.2。用去离子水定容至1L

4.在121℃高压蒸汽灭菌20min

5.该溶液在使用前,加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2

[2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下:用90ml去离子水溶解19g MgCl2,用去离子水调整体积为100ml,在121℃高压下蒸汽灭菌20min]。

1.4 SOC培养基1L

用于制备高效率的大肠杆菌感受态细胞,也用于热激后感受态细胞的复苏。

胰蛋白胨 20g

酵母粉  5g

NaCl    0.5g

KCl    1.86g

MgCl2 0.95g

琼脂粉 15g

葡萄糖(D) 3.6g

1.4.1 SOC液体培养基配制

1.在分析天平上称取上表中的组分(葡萄糖除外),加950 mL去离子水溶解。

2.用 NaOH调节pH至7.5,定容至1 L。115度高压蒸汽灭菌20分钟 。

冷却至室温后,加入5 mL的1M葡萄糖溶液(预先配制,用0.22um滤膜过滤除菌)。

Tips:葡萄糖不能预先加入。在高温条件下,单糖类物质会与游离氨基酸、肽类发生美拉德反应,生产不溶性深褐色产物,微生物无法利用,且有害,降低培养基营养价值。对于使用量大的实验室,可以预先配制250mM KCl溶液和1M MgCl2溶液,配制培养基时量取10 mL溶液加入。

1.5 2*YT培养基

2×YT培养基配方:

胰蛋白胨 16g

酵母粉  10g

NaCl    5

琼脂粉 15g

©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 215,723评论 6 498
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 92,003评论 3 391
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 161,512评论 0 351
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 57,825评论 1 290
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 66,874评论 6 388
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 50,841评论 1 295
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 39,812评论 3 416
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 38,582评论 0 271
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,033评论 1 308
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,309评论 2 331
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,450评论 1 345
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,158评论 5 341
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 40,789评论 3 325
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,409评论 0 21
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,609评论 1 268
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 47,440评论 2 368
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,357评论 2 352

推荐阅读更多精彩内容