1.介绍病毒的培养 与灭活

把病毒注入细胞工厂后，必须均匀摇晃，站病毒能平均分布到每一层。操作完成后，将细胞工厂放入36.5℃培养箱，每日观察并记录被感染细胞的脱落情况。

脱落越多说明病毒生长越多。平均3-5天就可以收获病毒。

把病毒培养出来，只是这一步，后面还有疫苗原液的纯化过程，还有很多的标定的过程，

评价的过程，这些过程可能漫长的过程，所以真正疫苗的成功，还有一段的周期。

病毒培养的原理：病毒能够寄生于宿主细胞达到增殖。

宿主细胞的选择与培养：细胞需铺一单层，贴壁生长。

设计问题：如何得知病毒的毒力与增殖能力？

观察细胞的脱落与病变情况。

灭活：5天之后，细胞工厂已经繁殖出数量可观的病毒，可以进行第一次病毒灭活了。

因为快到收获“死病毒”的阶段，所以行话叫“割韭菜”。

灭活就是消灭病毒的活性，操作者将灭活液注入细胞工厂并摇晃，使灭活液均匀分布。之后放入2-8℃的冰箱静置24小时。这一个灭活剂1，灭活动力曲线上来看，它在两个小时会达到一定的灭活的量。四个小时后几乎就全部灭活了。但是我们还是严谨地让它持续24小时灭活。收获原液之后还要进行二次的灭活。。二次灭活后病毒已无生存的可能，但疫苗研制需要做到百分之百的谨慎。实验者必需确认桶内病毒全部死亡。成为行业内最后一道安全关卡，用之前的细胞培养瓶，将二次灭活的病毒原液取样，再次放入培养瓶，如果3天内不能使新的病变，则再取培养瓶中细胞液进行培养，循环重复操作3次，若均无细胞病变，则说明灭活成功。

通过盲传三次检测的疫苗灭活原液送护送至疫苗工厂进一步纯化加工。制作不同浓度的研究性疫苗。为后续疫苗的临床评价和应用打下基础。

2.操作人员的工作程序与精神压力

P3工作室 人员的工作压力：光声的警报，中控，中控室 的各种工作安排

3.取核酸操作者会把病毒样本从冻存管中取出，往病毒里注入裂解液，把病毒毒株移入试管是实验人员最基础的操作。，也是最容易产生气溶胶污染的高危环节。

为保证不产生气溶胶，实验人员每次操作都要求移液器枪头绝对不能挤出最后一滴液体。

分寸全凭手感毫厘间的拿捏，每日1000多次重复的移液动作。不能有一次失误。

放入漩涡振荡器充分混匀，很快病毒坚硬的蛋白质外壳开始瓦解，使病毒的核酸能够从中跑出来。试管中液体包含着大量病毒核酸及裂解的杂质。

所以为了节约防护服，我们尽量的少喝水，不去卫生间。

因为我们实验室人员在P3室 里操作的同时，要听着声音的报警还要听着光的报警，

还要听着中控室老师的各种工作的安排。所以他在里面是高度紧张又得关注所有的这种细节。

洗脱杂质为了只把核酸筛选出来，需要放入离心机使核酸与其他物质分离

取核酸基因测序

对疾控工作人员的不了解不理解甚至拒绝共同乘坐电梯。

荧光PCR技术

检测新冠病毒毒力及繁殖能力

操作者会将病毒注入细胞培养瓶，在特制的细胞培养瓶中，健康的细胞会贴壁生长

我们评价病毒，是不是能够侵蚀细胞，它是不是能够很好地增殖。我们是用培养瓶的形式去观察的。瓶底养了一层细胞，这些细胞是贴壁生长的。当病毒感染了细胞，产生细胞病变以后，这些细胞就会脱落。这样就能看到空班以及脱落的情况。脱落的细胞在液体中游离。

当我们看到培养瓶里的细胞达到95%以上全部都脱落了。说明病毒毒力和繁殖能力相对来说比较强。病毒种子诞生了。疫苗研制过程中需要的大量的死病毒都来自于这粒种子。

在病毒培养阶段，实验人员最担心的是病毒活着却不增殖。好的细胞也很重要，在浩如烟海的细胞里寻找，谈何容易？即便选择好的品种，同时还要选择好的细胞代次，好的细胞培养时间，这些都需要千百次实验验证才能做到。

所以没有多年的技术及操作技巧的积累，很难第一时间摸索出准确的病毒培养方法。