一、纯化的病毒粒子转化法侵染
两篇文章均是差速离心法分离得到的病毒粒子+真菌原生质体（【现学现卖】实验-PEG介导原生质体转化；【现学现卖】实验-制备真菌原生质体）→PEG介导的原生质体转化法，最终使病毒侵染了真菌。
二、构建全长cDNA，体外转录侵染
上面这两篇文章是个“连续剧”中的一部分，文中真菌病毒DaRV是一个正义单链RNA病毒。文章1测了病毒全基因组序列并且构建全长cDNA克隆，文章2体外转录，制备真菌原生质体后进行电转。第二篇文章关于制备原生质体和电转实验的条件写得很详细。我整理的大致流程如下：
类似思路的还有这篇文章，故事很完整，推荐：
三、从纯化浓缩的病毒粒子中提取dsRNA，用于体外转录，侵染
文章分离得到病毒粒子，提取dsRNA，再使用 TNT Coupled Reticulocyte Lysate System (Promega)体外转录通过加热变性的dsRNA。之后导入真菌原生质体。
四、全基因组合成技术
总结前面介绍的几种方法存在的弊端：对于（一）中的方法，有的病毒粒子经过差速离心侵染活性降低；（二）是一个比较成熟的体系，基本都能做出来，只是比较麻烦；（三）一株真菌中病毒种类一般多于一种，如果两个病毒通过差速离心和蔗糖密度梯度离心不能分开，那么这个就不好用。
上周看《环球科学》总结了10项有望改变世界的技术。其中的全基因组合成技术可以让研究人员使用软件设计基因序列，合成后再导入微生物，实现特定功能，比如让细菌合成新型药物。文章讨论的都是医药领域，我当时想的只是不用构建这么多overlapping的载体可太好了。
全基因组合成技术普及的未来，我们研究寄主和病原物之间的互作肯定更加便捷。
