研究的总的模式
1.确定所要研究的疾病和表型
2.筛选所要研究的分子(具体见三变量)
3.设计实验
①根据分子选择相应的模型
②通过分子上调和下调观察其与表型之间的关系
(1)对于基因:
过表达可以插入启动子
下调是通过基因敲除
(2)对于RNA
下调用 RNAi
4.用相应的检测方法来检测分子表达变化
5.用相关的通路来解释机制
6.必要时可以与药物联系起来
7.验证
功能/编码基因研究的经典模式
DNA RNA和蛋白都可以设计,但最终都会落脚到蛋白的表达,所以主要聚焦于蛋白介导表型的研究思路。
1.表达差异分析
即检测蛋白在某种疾病中是否具有表达改变(qPCR和Western blot结果对比)
规律:分子为研究变量的实验中第一件事就是检测疾病过程中分子表达是否有明显改变。(也可以检测细胞模型和动物模型)
2.基因操作工具
过表达和沉默基因的相关操作
RNAi
3.细胞表型验证
①检验之前的基因操作的有效率
②在细胞水平验证分子与表型之间的关系
4.动物表型验证
5.rescue验证