一、非洲猪瘟抗原检测流程
1.样品的制备:实验室老师提前准备了阳性质控,取30ul阳性质控加入270ul的生理盐水中,做10倍稀释,稀释4次。
2.制好的样品放入传递窗中。
3.配反应体系:
1份反应体系由10ulPCR扩增反应液+5ul实时荧光混合液+5ul模板组成
按16份配制,取160ulPCR反应液+80ul实时荧光混合液,涡旋混匀,按15ul/管分别装于PCR反应管中,盖上盖子转移至传递窗待用。
4.核酸提取:
(1)取出深孔板,颠倒混匀使磁珠重悬,轻甩板孔使试剂盒磁珠集中到孔板底部,使用前按住深孔板小心撕去封口膜。
(2)在第2列的8个孔中,加入100ul样品,100ul生理盐水,20ul蛋白酶K。
(3)将磁棒套插入32道自动核酸提仪磁棒套架卡槽内
(4)选择程序并运行,自动化程序结束后,将第6列的核酸样品取出,待用。
(5)在配制好的反应体系配制液里分别加入阴性对照5ul,样品各5ul,阳性对照5ul,盖好盖子,瞬时离心,转至传递窗待扩增。
(6)使用PCR仪器扩增出结果。
二、微生物实验
1、培养基制备
将培养基(50ml),均匀倒入3块一次性培养皿,做好标记。
2、平板划线(3区)
用烧灼后的接种环挑取营养琼脂上的单菌落,接种到营养琼脂、麦康凯平板,做好标记,37℃孵育18-24小时。
3、药敏实验
(1)菌悬液的配置
在生物安全柜操作,准备一只无菌西林瓶,加入1ml左右生理盐水,用接种环无菌挑取营养琼脂上的典型单菌落在瓶壁上研磨充分,使菌落与生理盐水充分混合
将制备的菌悬液用标准比浊管校正至0.5麦氏单位
(2)接种平板
用无菌棉拭子蘸取菌液,在管壁内旋转挤压,去除多余水分,用拭子均匀涂抹培养基表面,可多个角度涂抹使其涂抹均匀,最后在琼脂平板边缘涂抹一圈。
(3)贴药敏片与培养
用记号笔在培养皿背面做7个区分布,做好记号1-7
用无菌镊子夹取药敏片平放在琼脂并轻压使其紧贴于琼脂平板,每次夹取药敏片之前都需要灼烧一次镊子
将培养基放于温箱,37℃培养18-24小时,观察结果。