DNA barcoding:是一种利用基因组内的DNA片段来鉴定生物物种的技术。
下文讲的是 inDrop scRNA-seq,它其中的barcode可以对单细胞进行标记,进而可分析sc RNAseq。原理如下:
1. 用消化酶分离细胞,制成细胞悬浮液
2. microparticle,试剂中含有微颗粒,和细胞在一个液滴(droplet)中时,能够在细胞中建立RNAseq文库。每个微颗粒上都附着同一种barcode,每个droplet上的RNA都被相同的barcode标记(给细胞贴上标签,每一个cDNA文库是一个单细胞独特的)
3. 油,油包水,形成一个个小液滴
4. 细胞裂解
5. 液滴内的RNA杂交(微颗粒内的重复T末端和ployA结合)
6. 打破液滴
7. 反转录
8. PCR扩增
9. 测序与分析:每个mRNA都匹配到原来的细胞和基因上
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https://www.youtube.com/watch?v=PFG_SKpM5OI