​Western Blot之实验介绍

       Western Blotting，即免疫印迹，是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术，它结合了 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率与抗原抗体反应的特异性。

       其基本原理是：通过电泳将蛋白组分分开，然后将电泳后凝胶上的蛋白质转移至载体膜上，用封闭试剂封闭载体膜上未吸附蛋白质的区域，最后通过免疫学检测来分析特定的蛋白质表达水平。

       免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端， 极大地提高了其分辨率和灵敏度，广泛地应用于检测特定基因表达产物的正确性，或者比较表达产物的相对变化量。

Western Bolt之实验前准备

       实验开始前，需准备好实验所需的各种试剂和耗材，主要包括：各种凝胶配置液、各种缓冲液、相关抗体、PVDF 膜，赛默飞公司的 QSP 盒装吸头及 Nunc冰盒，芬兰百得的各个量程单通道移液器等。

       主要仪器有：Thermo Scientific 全波长扫描式多功能读数仪、离心机、电泳仪等。

        接下来进入实验部分，本实验操作流程为：首先制备蛋白样品，然后进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，将电泳后凝胶上的蛋白质转移至 PVDF 膜上，接着对含有蛋白质的 PVDF 膜进行免疫学检测，X-胶片显影定影后，扫描图片，最后用 IPWIN6.0 软件分析结果。

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