文献信息
标题：Multiplexed analysis of EV reveals specific biomarker composition with diagnostic impact
日期及杂志：2023 Mar 4, Nat Commun
作者及单位：Joshua D. Spitzberg, Center for Systems Biology, Massachusetts General Hospital, 185 Cambridge St, CPZN 5206, Boston, MA 02114, USA
文献概述(这篇文献的结论是什么？)
该研究提出了一种名为MASEV的迭代多重标记的单个细胞外囊泡（EVs）分析方法，在 15 个 EV 生物标记物的 5 个多通道荧光染色周期中分析数千个单独的 EV。MASEV方法是通过将EV与带有可切割生物正交连接物（C2TCO）的荧光标记抗体结合。在染色过程中，EV被标记的抗体染色，形成荧光信号。然后，通过添加四氮唑（Tz）来切割连接物，将荧光标记从EV上去除。去染色后，EV的荧光信号消失，只剩下永久标记的EV信号。通过多轮的染色和去染色过程，可以获得EV的多个生物标志物的表达模式，从而实现对EV的深入分析。研究结果表明：一些被普遍认为是EV标志物的蛋白在EV中的表达并不如认为的那么普遍；只有一小部分EV单囊泡中同时存在多个标志物；亲和纯化可导致罕见EV亚型的丢失；深度分析单EV蛋白组成，可能提高疾病诊断特异性。
文章亮点(这篇文献的优点在哪？)
主要是实验方面的优点，提出一种新的sEV分析方法MASEV：
是基于传统显微成像技术的改进，与传统方法在EV的大小测定和生物标志物比较方面具有一致性，同时具有更高的效率
采用可切割生物正交连接物C2TCO进行循环染色，可以同时检测和分析多个生物标志物
MASEV创新性采用Tz/TCO切割方法，在多个循环中的可重复性非常好
相对于其他非成像sEV检测技术，MASEV快速、廉价，适用于大规模样本的分析
我的疑问(这篇文献的不足在哪？)
这个方法对于低丰度生物标志物的检测有一定难度，在重复循环时可能会受前一个循环的影响
这个方法使用特定的生物标记物来分析EV，且最多15种蛋白，不然循环染色次数的增加会对分析结果准确性有较大影响
和我相关(我从这篇文献里学到了什么？)
这篇文章主要讲了MASEV方法的原理、实验步骤和验证结果，以及与传统方法的比较
总结：MASEV可以通过以下步骤进行分析：
EV分离：研究中进行了预实验发现eDMC方法效果最好
切割和去染色：通过Tz进行快速去染色，可以通过测量荧光强度的变化来分析EV的生物标志物
EV图像获取：使用超分辨率显微镜对标记的EV进行图像获取
数据分析：对每个周期中EV的荧光强度进行定量测量，可以使用聚类分析和降维分析等方法对数据进行处理，以区分不同细胞来源的EV
数据验证：可以使用其他技术（比如NTA）验证分析的准确性
