Alternative pathway haemolytic assays
Alternative pathway
Protocol
- 使用Mg2+EGTA buffer将兔红细胞洗三次。
- 使用Mg2+EGTA buffer将兔红细胞重悬至6X107 cells/ml。
- 在兔红细胞中加入人类血清至1.3%人类血清浓度，在37℃混合孵育1h。
- 用分光光度法测定血红蛋白释放量(405 nm)，此则为溶血量。
材料
兔红细胞
Veronal buffer(pH 7.3):
0.15mM CaCl2
141mM NaCl
0.5mM MgCl2
1.8mM Barbitone sodium
3.1mM Barbituric acidMg2+EGTA buffer:
2.5 mM Veronal buffer (pH 7.3)
70 mM NaCl
140 mM glucose
0.1% gelatin
7 mM MgCl2
10 mM EGTA人类血清
