Alternative pathway haemolytic assays

Alternative pathway

Protocol

1. 使用Mg²⁺EGTA buffer将兔红细胞洗三次。
2. 使用Mg²⁺EGTA buffer将兔红细胞重悬至6X10⁷ cells/ml。
3. 在兔红细胞中加入人类血清至1.3%人类血清浓度，在37℃混合孵育1h。
4. 用分光光度法测定血红蛋白释放量(405 nm)，此则为溶血量。

材料

1. 兔红细胞

2. Veronal buffer(pH 7.3):
   0.15mM CaCl₂
   141mM NaCl
   0.5mM MgCl₂
   1.8mM Barbitone sodium
   3.1mM Barbituric acid

3. Mg²⁺EGTA buffer:
   2.5 mM Veronal buffer (pH 7.3)
   70 mM NaCl
   140 mM glucose
   0.1% gelatin
   7 mM MgCl₂
   10 mM EGTA

4. 人类血清

参考资料

1. Classical Pathway of Complement System
2. Scabies Mite Inactivated Serine Protease Paralogs Inhibit the Human Complement System