The EMBO Journal (2018), IF=9.889(根哥)
与细胞核染色质类似,线粒体基因组折叠并包装形成的球形特殊亚细胞器结构,称为线粒体类核(mitochondrial nucleoid)。线粒体类核是线粒体基因组储存、复制以及转录的重要场所,呈不连续的球状分布于线粒体基质中,单个线粒体常常包含有2-10个不等的类核。
Htr A2/Omi(High temperature requirement factor A 2,Htr A2)是一种进化保守的线粒体丝氨酸蛋白酶,由内质网合成,定位于线粒体膜间隙。
技术:
3D structured illumination microscopy
图像超分辨率Airyscan
IncuCyte FLR imaging
实验一
1)ABT-737抑制BCL-xL\BCL-2\BCL-w
2)ActD抑制MCL-1的转录
3)qVD是泛caspas抑制剂
1)和2)的连用可快速诱导细胞死亡;与3)连用可在短期内防止细胞死亡
通过缺失线粒体细胞色素c染色确定为发生了MOMP
SYTOX Green是一种可轻易穿过受损细胞质膜而不能透过活细胞质膜的绿色核酸染料,染死细胞。
S63845是一种选择性的MCL-1抑制剂。对其他Bcl-2成员,如Bcl-2或Bcl-xL,没有明显结合能力。ABT-737抑制BCL-xL\BCL-2\BCL-w。
综上,基质中的mtDNA可在caspas抑制条件下,从线粒体中依靠BAK\BAX引起的MOMP而被释放。
实验二
Caspase不依赖性的细胞死亡(CICD)
综上,mtDNA的释放和STING依赖的干扰素反应的激活之间的相关性。
实验三
ABT-737/S63845/qVD-OPh目的是诱导CICD
JF646-MOM显示线粒体外膜
Omi 表示MOMP
实验四
综上,mtDNA在CICD期间,先与内膜挤压外膜,随后mtDNA再被释放到胞质
实验五
已报道:在MOMP过程中,GTPase DRP-1促进线粒体网络断裂和内膜重构
→构建Cre 重组酶条件性敲除的Drp1 MEF稳株
如果内膜变得具有渗透性,Co2+将自由地进入基质并淬灭位于基质的钙黄素(calcein),从而能够实时检测增加的渗透性。
MPTP:线粒体通透性转换孔
综上,使mtDNA释放的MIMP独立于线粒体动力学和MPTP。
实验六
探究内膜如何破坏外膜,允许mtDNA释放
67A识别活性BAX
AIF检测内膜