这是2019年、来自Molecular Cell杂志的文献，现影响因子为17.97（根哥数据）。
通讯作者Michael Gale, Jr及其实验室的研究方向与先天免疫通路相关。
本篇的创新点就是将外源性IL-1β作为刺激，探究相关通路的激活响应。
一、 文章背景
介绍了PRR（模式识别受体）的三种组成，其中包括胞质DNA感受器。PRR信号包括NF-kB、IRFs（干扰素调节因子）、STAT（信号转换和转录激活蛋白）。
细胞因子同样也在先天免疫中发挥重要作用。“IL-1β被证明是炎症激活后的产物，且诱导NF-kB相关基因转录。（2010）” IL-1R可调控转录，以启动或维持ISG的表达。（实验室自引）。
IL-1β可启动细胞先天免疫，但其机制尚未完全明晰。
→→文章涉及cGAS-STING通路，IRF-IFN-ISG相关信号，IL-1β及其受体IL-1R。
二、文章研究思路
→→文章使用了A549和HFF、THP-1巨噬细胞作为实验材料。
1. 实验一
探究在不同细胞株中，IL-1β对IRF3磷酸化和IFIT1表达量的影响
IRF3的磷酸化升高又减少；IFIT1表达量升高又减少
A549细胞； QPCR；IRF3敲除；CCL4无明显变化；IFIT1和MX1基因表达量先升高后降低，敲除IRF3后降低得更多；CXCL10基因表达量降低，敲除IRF3后降低更多；
CCL4基因表达量降低；IFIT1基因表达量增加；CXCL10的表达总体增加；MX1表达量增加
CCL4/IFIT1/CXCL10/MX1表达增加
CCL4(NF-kB的靶基因)
IFIT3和MX1（IRF3诱导的靶基因）
CXCL10(同时响应IRF3和NF-kB)
通过蛋白（直接）和基因（间接）证明，外源IL-1β能激活IRF3。
2. 实验二
1.1 检测IL-1β诱导的TBK1/IKKε激活中，MAVS、STING、TRIF的作用
CCL4在敲除MAVS、STING、TRIF后，表达量低（包括对照组→更低），但加入IL-1β诱导后，对照组表达量升高，敲除组同样升高但不明显→说明CCL4对敲除的几个基因的调控作用不明显；IFIT1在敲除几个基因后表达量略微变化，加上IL-1β诱导，仅g-STING降低（但与对照组无差异→无效），其余升高；对照组敲除后，CXCL10表达量普遍低，加入IL-1β后升高，g-STING组除外；对照组敲除后，MX1的表达量变化，加入IL-1β诱导后，升高，g-STING组除外。
【感觉缺少实验组的差异分析，因为实验的目的主要是IL-1β存在下的作用探究】
IFIT1和MX1在敲除cGAS和STING后，其表达量都降低，表明两基因的表达受cGAS和STING的调控；而在CCL4表达变化中，cGAS对CCL4的影响更大；CXCL10的表达量变化中，同样在6小时后呈现更低的表达量，表明受cGAS和STING的调控。
IFIT1和CXCL10、MX1，在IL-1β诱导下，受到STING的正调控
IL-1β调控IRF3磷酸化的表达，且受到cGAS和STING的正向调控；而P65的磷酸化是先升高后降低
IL-1β使cGAS和STING的磷酸化表达量增加
HFF细胞本身高表达STING；IL-1β诱导后，STING同DNA、cGAMP处理相似，围绕在核周围变多
IRF3的激活是由TBK1和IKKε蛋白激酶介导的，它们与MAVS（线粒体病毒信号转导激活因子）、STING或TRIF（TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β）等衔接分子协调，以调控下游底物。
通过WB和Qpcr实验，在蛋白和基因水平上，证明了外源IL-1β对IRF3的激活依赖于cGAS和STING通路。
并且，通过免疫荧光，表明了IL-1β的诱导也会促进STING在核周的重定位。
3. 实验三
最左边是亚细胞分离提取的示意图；右边两个是两个细胞株验证分离效果
细胞色素c氧化酶（COX）是呼吸链末端的酶复合体，由13个亚单位组成，定位于线粒体内膜。COX IV是其亚基之一，可以作为线粒体的marker，也可以用作研究细胞线粒体凋亡调控。
TN（tunicamycin，衣霉素）处理细胞可导致内质网应激。
在基因水平上检测IL-1β处理后，mtDNA表达量变化→升高
MFI（平均荧光强度）；IL-1β处理后，线粒体质量增加，膜电位降低→复合线粒体自噬特点
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电Ψm位的荧光探针。
Mitotracker Green是线粒体质量检测染料。
左边是免疫荧光；右图是Qpcr，可看出mtDNA经溴化乙淀处理后释放减少
ethidium bromide溴化乙淀用来抑制mtDNA的复制。
IFIT1、CXCL10、MXI的表达受mtDNA正向调控，但IFIT1对核DNA不敏感
综上，IL-1β信号诱导mtDNA释放，并激活先天免疫
4. 实验四
IKKβ对线粒体膜上TOM20有影响；IKKε对线粒体膜上TOM20和VDAC蛋白都有影响
ACHP是IKKα/β的抑制剂；
PF184和TPCA1是IKKβ抑制剂。
BX795是TBK1/IKKε 的抑制剂。
加入IKKα/β/ε 抑制受体后，用IL-1β诱导，可继续使P65磷酸化；但IRF3的磷酸化却不能挽回、
TNFα诱导NFκB表达，并抑制线粒体外膜蛋白TOM20和内膜细胞色素C的表达
TNFα对mtDNA释放的影响不大（2021年一篇Cell Reports的文献证明TNF对mtDNA的释放作用）
综上，IL-1β诱导mtDNA向细胞质释放，然后通过cGAS检测到其激活STING和IRF3。
5.实验五
未敲低前,IL-1β促进干扰素基因的表达；敲低STING后，IL-1β诱导下，干扰素基因的表达量仍旧下降
敲低IRF家族对干扰素基因表达的影响，其中IRF3对干扰素基因的表达影响最大
IL-1β对STAT1/2磷酸化的影响，在不同的细胞株中有不一样的表现
上一实验中，证明STAT1的磷酸化在12h减少，但加IGg促炎症后，其磷酸化再次增加
IFNAR1敲除后，IRF3的靶基因基本不表达，NF-κB的靶基因表达水平降低
综上，IL-1β刺激IFN产生和ISG表达。
6. 实验六
目的基因（GOI）；IL-1β与其他PAMP联合处理有协同作用
LPS是通过TRIF信号轴作用的。
LPS在12h内促进相关基因的表达；右图是ELISA实验，LPS处理后IL-1β表达量升高，且敲除IL-1R1后也不影响IL-1β的表达
IL-1R1是IL-1（IL-1β）的受体类型之一，起传递信号的作用。
在干扰素诱导剂的存在下，相关基因12g内表达升高；右图显示干扰素诱导剂促进IL-1β的分泌，且敲低IL-1R1后仍然增加其分泌
综上，IL-1β和相关的PAMPs具有协同反应
7. 实验七
IL-1β和IFNβ都抗登革病毒感染（左图）；细胞死亡在后期48h后，都是相似的
IL-1β不起作用（STING在off gRNA为什么前24h没有？）
在24h前IL-1β有抗病毒作用，敲除其受体后没有
综上，IL-1β-cGAS-STING-IRF3轴限制登革病毒感染
