皮肤石蜡切片
1.取材：用锋利的刀片切取材料。
2.固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液(即10%甲醛或者4%PFA in 1xPBS)中固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。
3.放入全封闭式脱水机中（由于是皮肤组织不用洗涤直接放入脱水机中）。脱水机可以进行酒精脱水，透明和透蜡这三步。
酒精脱水：一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。
透明：材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸15—30分钟，再转入纯二甲苯中透明（至透明为止），一般15—30分钟。
透蜡：材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石蜡等量的混合液中约30分钟，然后进入纯石蜡中约40—60分钟，再换纯石蜡一次约40—60分钟。
4.自动包埋机中包埋样本。
5.切片并贴片。(切5um)
6.染色的一般方法
由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。
脱蜡至水
7.二甲苯脱蜡5-10min（建议10min）。
8.二甲苯与纯酒精等量混液5min。
9.纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。
10.蒸馏水5min(置于摇床上)，2次。
（此步骤直接HE的苏木精染色及后面步骤，具体见HE染色方案，或者接下面的免疫染色）
抗原修复
11.二甲苯中浸泡2次，每次20min.
12.分别在100%，95%，80%，60%的乙醇中浸泡，每种5min。
13.ddH2O中浸泡3次，每次1min.
14.浸入抗原修复液中（Tris-EDTA,PH9）,微波炉中中火10min.室温自然冷却35min。抗原修复液不可交叉使用。抗原修复液种类根据要验证的蛋白类型来选择。膜蛋白和胞质蛋白所推荐修复液不一样。
15.1XTBS 洗三次，每次5min。
16.封闭液（5% goat serum in 1xPBS，封闭血清不能与二抗来源一致）室温封闭1h.
17.一抗(用1xTBS稀释)室温2h(要放在湿盒中防止干掉)或者4℃过夜。抗体现配现用，且不要反复冻融。
- 1XTBS 洗三次，每次5min。
19.二抗(用1xTBS稀释)室温1h避光。 - 1XTBS 洗三次，每次5min。
21.封片液(含DAPI)封片。
22.荧光显微镜观察。
抗原修复也可以采用这个方法：这是我从一个有长期石蜡切片免疫染色经验的实验室的师姐那里求来的。她说他们一直用这个方法，挺好用的，可以一试。
柠檬酸：Citric acid 品牌：sigma anhydrous, cell culture tested, plant cell culture tested Catalog #: C2404-100G
柠檬酸钠：二水合柠檬酸三钠Sodium citrate tribasic dihydrate ACS reagent, >= 99.0% 品牌：sigma Catalog #: S4641-500G
柠檬酸（100mM）：500 ml ddH2O + 9.6 g 柠檬酸
柠檬酸钠（100mM）：500 ml ddH2O + 14.7g 柠檬酸钠
柠檬酸钠修复液（200ml）：3.8 ml 柠檬酸（100mM）+ 16.2 ml 柠檬酸钠（100mM）+ 180 ml ddH2O
配制柠檬酸钠修复液（200ml）：3.8 ml 柠檬酸（100mM）+ 16.2 ml 柠檬酸钠（100mM）加ddH2O定量至200 ml。
抗原修复：柠檬酸钠修复液浸泡，置于58℃烘箱内过夜（12-16h）。
