转膜简单来说:把SDS-PAGE凝胶里的蛋白,把电流“赶”到膜上(PVDF/NC膜)并固定下来。
1.带电迁移
蛋白在SDS包裹下,带均一的负电荷,通电后,蛋白从负极往正极方向移动。
2.筛选与吸附
蛋白从凝胶中“挤出来”,并被膜(PVDF/NC)吸附固定。
膜表面带有 疏水作用 + 静电吸附力。
3.蛋白固定在膜上,不再流动
为后续抗体结合准备“舞台”。
转膜的结构(从阴极到阳极)
(-) 黑色 → 海绵 / 滤纸 / 凝胶 / 膜(PVDF或NC) / 滤纸 / 海绵 → 红色 (+)
4针对转膜存在的症状 以及可能原因
| 无条带 | 转膜方向错 / 气泡 / 未活化膜 |
| 条带浅 | 转膜不足 / 蛋白量少 |
| 高背景 | 封闭不充分 / 抗体浓度太高 |
| 小蛋白消失 | **过转**(吹膜现象) |