关于微阵列芯片和RNA-seq的比较

转录组代表存在于细胞中RNA的全部类型,包括mRNA、rRNA、tRNA以及其它各种非编码RNA等。转录组是了解细胞过程的主要手段,微阵列(Microarray)和RNA-seq(RNA sequencing)是转录组分析中的两种主要技术。它们的主要区别在于,微阵列基于预先设计的标记探针与目标cDNA序列的杂交,而RNA-seq通过测序技术对cDNA链进行直接测序。

微阵列

微阵列取决于杂交探针,根据杂交信号强度定量基因相对表达水平。

首先从样品中提取总RNA,然后构建cDNA文库。将cDNA与预先设计的带荧光标记的DNA探针在固体表面(spot matrix)混合,互补序列将与微阵列中的标记探针杂交。通过检测微阵列的探针荧光强度,这些探针代表了不同的基因,可获得各基因的相对表达谱。

一般而言,微阵列探针的荧光强度应与样品中互补cDNA(代表转录物)的丰度成正比。但是该技术的准确性取决于所设计的探针,已知序列的碱基组成以及探针杂交的亲和力,因此具有局限性。微阵列技术不能用低丰度的转录本进行,且不能区分同工型以及鉴定遗传变异。此外,探针也常伴随交叉杂交,非特异性杂交等问题。

微阵列芯片


RNA-seq

RNA-seq是一种快速且高通量的方法,不依赖于预先设计的探针或已知的序列碱基特征,因此具有较高的灵敏度和检测新基因以及遗传变异的能力。

首先提取总RNA并在纯化后片段化处理,然后构建cDNA文库,使用高通量测序的方法对cDNA进行测序。获得测序序列后比对到参考基因组上(或者从头组装转录本后再比对),根据测序序列的覆盖情况定量基因表达。

理论上,如果测序深度足够深,则可以覆盖到所有基因,包括尚未发现的新基因,并能实现全长基因水平的定量。并且RNA-seq本身是一种测序技术,能获得基因的碱基组成信息,因此除了用于定量基因表达外,还可用于基因组结构研究,这是微阵列芯片无法比拟的。但是高通量的方法存在一定的假阳性问题是不可忽视的,并且二代测序在建库时也存在非特异性扩增的偏移,三代测序定量相对准确但价格昂贵。

RNA测序(RNA-seq)


微阵列和RNA-seq的比较

就目前来说,小编比较推荐使用RNA-seq进行转录谱研究。一是数据量大,覆盖基因组范围更广;二是不受物种基因组是否已知所限制;三是RNA-seq数据的灵活度高,并能用于基因组结构分析。

微阵列和RNA-seq的比较


参考链接

https://www.differencebetween.com/difference-between-microarray-and-vs-rna-sequencing/

©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 218,036评论 6 506
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 93,046评论 3 395
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 164,411评论 0 354
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 58,622评论 1 293
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 67,661评论 6 392
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 51,521评论 1 304
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 40,288评论 3 418
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 39,200评论 0 276
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,644评论 1 314
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,837评论 3 336
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,953评论 1 348
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,673评论 5 346
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 41,281评论 3 329
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,889评论 0 22
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 33,011评论 1 269
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 48,119评论 3 370
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,901评论 2 355

推荐阅读更多精彩内容