FluoTag-X4抗RFP是由两种内部开发的单域抗体(sdAbs)混合而成,能够以高亲和力和特异性识别最常见的红色荧光蛋白,如mRFP、mCherry、DsRed以及其他DsRed衍生物。它与荧光团结合,可实现直接且高度特异性的荧光检测,无需使用二抗。
最早被描述的红色荧光蛋白之一是来自珊瑚盘菌(Discosoma sp.)的DsRed。自1999年发表以来,经过20多个突变,几年后出现了一种具有多种增强特性的单体版本mRFP1。从这种有前景的单体红色荧光蛋白中,人们已经描述了几十种单体变体,其中mCherry是最受欢迎的衍生物之一。如今,在“fpbase”荧光蛋白数据库这个开源数据库中,可以找到800多种各种荧光蛋白的条目,其中包含了目前可用的最新变体。
NanoTag的纳米抗体可以特异性且牢固地结合DsRed、RFP、mCherry以及其他家族成员。FluoTags直接与荧光团结合,但也可以配备单个荧光团以获得更定量的读数(FluoTag-Q),或者每个单域抗体配备两个荧光团(FluoTag-X2)。此外,NanoTag还开发了一种混合两种sdAbs的组合,它们可以同时结合目标蛋白,并且每个都带有两个荧光团,总共在目标蛋白上装饰4个荧光团(FluoTag-X4)。
艾美捷FluoTag-X4抗RFP AbberiorStar635P:
货号:N0404-Ab635P-L
克隆:2B12、2A1
宿主:羊驼
生产于:大肠杆菌
应用:免疫荧光(细胞内染色)
注意:不建议在Western blot中使用该产品,因为sdAbs主要识别天然/折叠蛋白。
稀释度:1:250(相当于每种sdAb克隆的浓度为5 nM)
靶标:mRFP
特异性:mRFP(红色荧光蛋白)以及其他衍生物,如mOrange、dsRed1、dsRED2、tdTomato、mCherry和mScarlet-i。
配方:从含有2% BSA(美国产地)的pH 7.4的PBS中冻干两种sdAb克隆的混合物。
运输:常温
储存:含有冻干试剂的安瓿瓶可在2-8°C下储存长达12个月。复溶后,可在-80°C下储存长达6个月。工作分装可在-20°C下储存长达4周。
注意:仅用于体外/研究目的。无毒、无害、无传染性。

使用FluoTag-X4 Atto 647N抗RFP sdAb(货号N0404,稀释度1:500)对表达TOM70-mCherry报告蛋白的PFA固定3T3细胞进行免疫染色(mCherry信号以红色表示,相应的FluoTag信号以绿色表示,两个通道的合并以黄色表示)。细胞核通过DAPI染色(蓝色)可视化。
文献参考:
Sanfilippo P, Kim AJ, Bhukel A, et al. Mapping of multiple neurotransmitter receptor subtypes and distinct protein complexes to the connectome. Neuron. Published online January 13, 2024. doi:10.1016/j.neuron.2023.12.014 (IF; fruit fly)
Rey S, Ohm H, Moschref F, Zeuschner D, Praetz M, Klämbt C. Glial-dependent clustering of voltage-gated ion channels in Drosophila precedes myelin formation. Elife. 2023;12:e85752. Published 2023 Jun 6. doi:10.7554/eLife.85752