2019APT(152)-001 三十年的核酸适配体筛选方法综述
推荐指数：*****
【推荐语】我特地查了一下负责作者，至少有18篇aptamer相关的文章，还写过一本书。这篇综述还是非常全面的，值得所有做筛选的朋友阅读。
一、内容简介：
这是一篇介绍自1990年以来核酸适配体筛选技术的综述。从筛选的重要环节入手，介绍每个关键环节前人的探索。内容框架如下
1 介绍 总体介绍了适配体筛选技术的发展历史。重要的是明确指出当前核酸适配体领域的面临的问题，依然是筛选效率低下的问题。这与我们之前会议期间得出的结论，以及我个人的观点一致。筛选技术只有当成本降低到一定阈值一下，成功概率提升，以及不确定性降低时，才可能迎来爆发式发展。
2 。SELEX库设计 介绍了使用RNA还是DNA文库，文献来看，目前多用DNA文库。早期多用RNA文库。DNA文库具有便宜、易操作、更稳定等优势。也有不足之处，不变在细胞内表达。
引物区会参与折叠，所以，有些aptamer把引物区去掉就会完全丧失活性。【评论】不过我们设计的闭环文库多数可以直接去掉引物区而不影响结合。
随机长度的问题30-50。
还有一些引物G4结构，扩展的碱基来增加库容和筛选的成功率。
通过计算来进行筛选。【2019年另一片文献50是纯计算筛选】
文章花了比较大的篇幅介绍文库设计、修饰碱基，引物设计等。
简言之：成功筛选过的文库，可以直接参考，适合PCR的引物都可以。
3 。靶标准备及其对结合/未结合序列分离的重要性
绝大多数的饿筛选方法都是以分离技术命名的。所以，这部分其实主要是介绍筛选方法的。讲到了很多分离方法，从早期的膜分离方法，到后来的电泳，毛细管电泳，微流控技术。不同的洗脱条件，固定文库筛选技术，流式筛选技术，cell-SELEX等。
4 。PCR反应和PCR偏差
PCR引起的偏差是导致失败的重要原因之一。一句话总结这部分就是 建议使用乳浊液PCR。国内有专门的试剂盒提供，可以大大提升筛选成功率。https://www.aptamy.com/productinfo/506005.html
5 。ssDNA制备的四种常用技术
四种方法分别是SA-磁珠法、不对称PCR、lambda核酸外切酶降解法、以及长短链法等。原作者的评述我觉得不是特靠谱，可能有些他们并没有做过。我个人的观点是：长短链法的质量最可靠，SA磁珠法最方便，lambda核酸酶法最经济，不对称PCR法最不靠谱。
6 。通过Post SELEX修饰增强适体的药物样特性
后修饰和筛选过程中就修饰如何选择？ 筛选过程中就用修饰碱基看起来最好，但会面临PCR等一系列问题。
7 。结论
没有任何一种方法可以适合所有的靶标。目前筛选依然需要继续探索和改进。
二、关键词：综述 筛选方法 文库设计 单链制备
三、文献信息：
1 Wang, T., Chen, C., Larcher, L. M., Barrero, R. A. & Veedu, R. N. Three decades of nucleic acid aptamer technologies: Lessons learned, progress and opportunities on aptamer development.Biotechnol Adv37, 28-50, doi:10.1016/j.biotechadv.2018.11.001 (2019).
四、原文链接
https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0734-9750(18)30177-0
【讨论】
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核酸适配体领域的发展，离不开我们的共同努力。如果你有更好推动这个领域发展的建议，欢迎分享给我。您的宝贵意见可以发送到 aptamers@163.com 谢谢！
罗昭锋
希望能为适配体领域的发展尽一份力！
