材料
基础营养培养基，如DMEM
营养物质：无机盐，氨基酸，维生素
微量元素
添加剂：生长因子和激素，其他各种培养基成分（见表1)
凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基，减少未限定培养基成分的浓度，直至细胞增殖能力降低，但活力仍较高。
进行各种营养成分的不同浓度影响细胞增殖的实验。将已知的对至少一种细胞增殖有影响的营养成分，按以下分组进行测定：
a. 能源（葡萄糖和谷氨酰胺）；
b. 微量元素和电解质(Na+、Cl–、K+、Ca2 +、Mg2+Cu2+、Fe2+、Se 、H2P04–和HC03–) ;
c. 氨基酸（谷氨酰胺、胱氨酸、半胱氨酸、组氨酸） ；
d. 维生素（ 生物素、维生素B12 );
e. 脂类和脂的前体物（油酸、亚油酸与脂肪酸结合的胆固醇－游离BSA; 与组分A连接的未限定脂类；低密度脂蛋白、乙醇胺或磷酸乙醇胺）。
确定大多数限制因子的最适浓度范围，并且确定中心范围的浓度；重复生长实验，依次确定并优化每种限制因素。
降低未限定的添加成分的浓度，重复优化步骤。继续优化营养成分，直到其缩减的浓度得不到补偿。
优化培养基中的生长因子、激素、转运蛋白及黏附因子等添加物质，可以单独试验，或者与培养基营养成分联合应用试验。
a. 储存液需要过滤除菌，将粉末状的葡萄糖和谷氨酰胺（或冷冻的分装液需融化）加入到重组的粉末状培养基中。
b. 条件培养基必须由研究者按照实验目的选择细胞自行配制。
