使用浓度说明
储备液浓度0.1mg/mL,即100ng/uL;
诱导BMDM时,10cm培养皿中的培养基体积为10mL,M-CSF浓度为20ng/mL,因此要加2uL的M-CSF
1次实验,要做1只野生型小鼠,1只突变型小鼠,每只小鼠用2个10cm的培养皿,每个培养皿用10mL的DMEM培养基,因此储备液要分装在EP管中,每管分装8uL,1次用掉1个EP管。
以10ug的量为例说明分装方案(参照其说明书进行):
Catalog # 315-02
Lot# 0914245
以下的官网的溶解方法:
细胞因子溶解方法
PeproTech细胞因子中不含载体蛋白(Carrier Protein)或其他添加剂(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以最少量的盐来进行冻干处理,因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,形成很薄或不可见的蛋白层。所以我们建议在收到产品后,务必在开盖前先离心,使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。
1.离心:高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2.溶解(Reconstitution):用去离子水或其它缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的产品,需用10uL-100uL的去离子水或缓冲液溶解)。溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择:
要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。
- 分装和贮存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液,稀释可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中最好含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)来稳定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需长期保存,则需分装冻存于-20℃ (注意:不可冻存于-80℃)。分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量,以实现每次实验用完一只工作液,避免反复冻融引起蛋白活性的降低。
分装注意事项:
用100uL的去离子水充分溶解,浓度即为100ng/uL(溶解前先离心样品,使粉末沉积在底部);
然后在每个EP管中装8uL;
1次实验,要做1只野生型小鼠,1只突变型小鼠,每只小鼠用2个10cm的培养皿,每个培养皿用10mL的DMEM培养基,因此1次实验(第1次加M-CSF),1个培养皿中是加入2uL的储备液(2uL含200ng rM-CSF,培养基的浓度就为20ng/mL);4个培养皿就用掉8uL;第2次的换液的时候,用20mL的培养基,培基的rM-CSF浓度为40ng/mL,对每个培养皿进行半数换液,即去掉原来培养皿(原培养皿是10mL)一半的培养基(5mL),加入含40ng/mL rM-CSF的5mL培养基。