非编码RNA Gas5在细胞生长停滞和营养缺乏时抑制糖皮质激素受体活性
文献影响因子：6.5
一、Gas5调控机制
糖皮质激素在细胞生长、能量消耗和生产过程中影响基因的转录，Gas5是一种在细胞缺乏营养物质或生长因子导致生长停滞时高表达的非编码RNA，通过抑制糖皮质激素介导的几个应答基因的表达促进细胞凋亡。Gas5作为糖皮质激素响应原件诱饵与响应原件（GRE）竞争结合到糖皮质激素受体（GR）的DNA结合位点，调控基因的表达。
二、核心实验和结果
1、作者先通过RIP实验和荧光素酶实验验证细胞受Dex处理后Gas5与糖皮质激素受体（GR）结合增加，抑制GR对靶标基因转录的活性。
图A-B是RIP实验，用GR抗体钓取Dex处理和未处理细胞中与GR结合的RNA，然后进行q-pcr检测，表明在Dex处理后，细胞的Gas5与GR结合增加。图C是荧光素酶实验，将Gas5表达质粒、GR表达质粒和连接GRE的荧光素酶报告质粒共转染细胞，然后检测荧光素酶活性，表明Gas5抑制GR的转录活性但不抑制包含GAL4的嵌合体的转录活性。
2、作者的第二个关键的实验是通过RNA-FISH和核质分离对细胞中Gas5和GR进行定位来说明细胞在Dex处理后Gas5和GR转移进入细胞核参与GR应答。
图A是RNA FISH，用Gas5探针检测细胞中的Gas5，表明细胞核和细胞质中均含有Gas5，下图使用RNase处理作为阴性对照。图B是核质分离实验，用Dex处理细胞后进行核质分离，然后分别检测细胞质和细胞核的GR和Gas5，表明Dex处理使细胞质中的Gas5和GR转移进入细胞核。
3、对Gas5进行过量表达后用Dex处理细胞检测细胞的GR反应原件基因的表达，说明Dex刺激Gas5抑制基因表达，然后通过ChIP验证Gas5抑制GR与基因启动子结合。
图A是Gas5过量表达细胞株构建后的检测。图B是Gas5过量表达后检测clAP2 mRNA的表达，表明Gas5过量表达后Dex的处理使clAP2mRNA的表达降低。图C是ChIP实验，用GR抗体钓取Dex处理和未处理的Gas5过量表达细胞中与GR结合的DNA片段，然后进行q-pcr检测跑胶，表明Dex处理使GR结合到clAP2启动子上减少。
4、将Gas5表达质粒转染细胞后检测GR应答相关基因的表达，然后通过ChIP实验说明基因的表达是受Gas5与GR互作抑制。
图A是Gas5表达质粒转染细胞后，用Dex处理，然后检测细胞GR诱导的基因mRNA的表达，表明Gas5表达使mRNA表达降低。图B是ChIP实验，Gas5表达质粒转染细胞后，用Dex处理，然后用GR抗体钓取细胞中与GR/GRE结合的DNA片段，进行q-pcr检测，表明Gas5表达使GR/GRE与基因启动子结合降低。
参考文献：Tomoshige Kino,Darrell E. Hurt,Takamasa Ichijo,etal.Noncoding RNA Gas5 Is a Growth Arrest andStarvationAssociated Repressor of the Glucocorticoid Receptor[J].Sci Signal,2010, 3(107): ra8
