细胞培养基（cell culture medium）是人工模拟动物细胞的体内生长环境，维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础，其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压，以及细胞本身不能合成的各种营养物质。是细胞培养中不可缺少的营养成分。

细胞培养基常见知识科普

1. 细胞培养基的配制和储存应该注意什么？

如果是实验室购买的商用化培养基，按照说明书保存方式储存即可。一般即用型的培养基保质期是3个月，开封后需尽快用完。如果是自行配制培养基，则需要先进行无菌检测（取少量培养基放入培养器皿内，于37℃培养箱中放置过夜）。建议一次性不要配制太多，一是量大易造成污染，二是长时间未使用营养成分易降解损失较大。

2. 培养基为什么最好保存在4℃冰箱，不能冷冻？

培养基中成分多达几十种有余，各个成分混合在一起形成一个适合细胞培养的渗透压。许多成分是需要通过加酸加碱促溶的，一旦把培养基放到-20℃冰箱冷冻后，再解冻，会有许多成分不能够溶解，从而导致渗透压改变，不适合细胞生长。另外一种原因是由于培养基中的缓冲成分与CO₂共同作用形成一个缓冲体系来调节pH，许多动物细胞培养都需要一个适宜的pH（7.2-7.4），一般不超过6.8-7.6为宜。培养基冷冻后，液体中的CO₂便会逸出，培养基中的CO₂减少，将会导致培养基pH升高。当然培养基也不能长时间放在常温，培养基中也有许多活性成分，常温下会加速成分的降解。

3. 为什么培养基变紫了？

有时候会发现培养基保存在4℃冰箱，颜色会偏紫，这也是由于CO₂逸出，解决办法是将培养基瓶盖拧松半圈放置于二氧化碳培养箱中，一段时间后，培养基pH将会恢复正常。

4. 为什么培养基变黄了？

（1）代谢：细胞生长旺盛

（2）污染：细菌大量繁殖，细胞大量死亡

（3）缓冲系统/CO₂过高

（4）血清用量大

细胞培养过程中，培养基中的糖类和氨基酸等有机物质会在培养过程中逐渐分解，产生一些氧化产物，这些氧化产物会与培养基中的无机盐、金属离子等发生反应，形成一些有色化合物，导致培养基的颜色变黄。另外由于细胞代谢产酸，培养了细胞后的培养基会从红变黄，如果培养基是橘黄色，则是细胞健康生长的颜色，无须担心，继续培养即可。若细胞状态良好，但换液后培养基颜色变黄快，则可能是因为细胞密度大或消耗过大，提示需要传代了。若细胞状态差，生长异常，培养基很快变黄，变浑浊，镜下观察有较多小颗粒物，则有可能是细菌污染。

5. 为什么有的要求培养基中不含酚红？

酚红常添加到培养基中，作为pH指示剂。对于大多数培养基（pH7.4），呈鲜红色。当培养基pH偏低时，培养基呈现黄色，当培养基pH偏低时，培养基呈现紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），因此在培养雌激素敏感细胞时，如乳腺组织，推荐使用不含酚红的培养基。一些研究人员在做流式细胞检测时，由于酚红的颜色会干扰检测，通常会使用不含有酚红的培养基。此外，在一些无血清制剂中时，酚红会破坏钠钾离子的稳定状态，也不推荐添加酚红。

6. 有无不受CO₂影响的培养基？

如果缓冲体系不是NaHCO3，而是其他体系如HEPES，就不受CO₂的影响。

7. 能否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能突然改变细胞的培养环境，每株细胞有其适应的培养基，突然换成和原先培养条件不一样的培养基，会导致细胞活率降低，或者形态改变。例如下图，正常HT29生长状态呈岛状生长，用McCoy’s 5A完全培养基培养细胞呈岛状形态，慢慢堆叠生长；低密度时小块状或小球状形态。而用高糖DMEM培养细胞呈麦芒状，短梭形，成纤维样。除了HT29，231，468都有这样特性，不同基础培养基养出来细胞形态不一样。这可能是因为不同基础培养基令细胞代谢组产生变化，形态发生改变。

8. 如何正确选择培养基种类？

（1）首选建系所用的培养基，可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。

（2）权威网站查询：ATCC（American Type Culture Collection）

（3）培养基筛选：多种培养基培养目的细胞，根据生长状态，克隆形成率等指标判断。客观但繁琐。

（4）根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如进行细胞杂交、基因转移实验，可选择IMDM；DMEM-H，成脂；DMEM-L，成骨。

（5）全新的细胞要参考同胚层或者、同组织、同类型的细胞的条件。