本文选自gastroenterology， https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.031，喜欢的朋友可以自行下载阅读。
上图。
摘要：内质网到核信号转导1(ERN1，又称IRE1A)是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者肝脏中激活的未折叠蛋白反应的感受器。IRE1A活化后，肝细胞释放富含神经酰胺的炎性细胞外小泡(EVS)。我们研究了抑制IRE1A对饮食性脂肪性肝炎小鼠炎症EVS释放的影响。C57BL/6J小鼠和Ire1a肝细胞特异性干扰(IRE1HEP)小鼠被喂以高脂肪、果糖和胆固醇的饲料以诱导脂肪性肝炎的发生或标准饮食(对照组)。αΔ-HEP小鼠是C57BL/6J小鼠和Ire1a肝细胞特异性干扰的小鼠(IRE1HEP)。部分小鼠腹腔注射IRE1A抑制剂4μ8C。用表达IRE1A的腺病毒或腺相关病毒转导小鼠肝细胞和原代肝细胞。取小鼠肝脏，采用定量PCR和染色质免疫沉淀法进行分析，血浆标本采用ELISA法进行分析。EVS取自肝细胞，静脉注射于小鼠体内。血浆EVS通过纳米颗粒跟踪分析、电子显微镜、免疫印迹和纳米级流式细胞术进行表征；我们使用膜标记的报告小鼠来检测肝细胞来源的EVS。对NASH患者和非NASH患者(对照组)的血浆和肝组织进行EV浓度分析、RNAScope和基因表达分析。破坏肝细胞中的Ire1a或抑制IRE1A可减少食用FFC饮食的小鼠EVS的释放和肝脏损伤、炎症和巨噬细胞的积聚。在小鼠的肝脏中，IRE1A的激活刺激了肝细胞来源的EVS的释放，也刺激了培养的原代肝细胞的释放。静脉注射IRE1A刺激的、肝细胞来源的EVS的小鼠在肝脏中积累单核细胞来源的巨噬细胞。IRE1A刺激的EVS富含神经酰胺。染色质免疫沉淀表明，IRE1A能激活X盒结合蛋白1(XBP1)，增加丝氨酸棕榈酰转移酶基因的转录，丝氨酸棕榈酰转移酶基因编码神经酰胺生物合成的限速酶。给小鼠注射丝氨酸棕榈酰转移酶的药理抑制剂可减少EVS的释放。NASH患者肝组织中XBP1和丝氨酸棕榈酰转移酶水平升高，血浆EVS数量增加，且与炎症组织学特征相关。
内质网应激在很多疾病中都有所设计，尤其是那些牵涉到细胞内过氧化的问题，有研究表明内质网应激可以促进ROS的产生，从而引起细胞对铁死亡增敏。本文介绍了内质网应激促进外泌体释放的，并且可以看到脂质代谢的异常。
文章主要说明了几个问题，首先，IRE1A促进了NASH形成 ，其次，IRE1A通过调控了XBP1改变了EV的释放，最后，EV诱导了NASH的炎性环境，对NASH形成起到支持作用。
上来就做表型，通过对比CD和FFC饮食，看看IRE1A抑制剂对NASH形成、XBP1的表达、EV释放的影响。发现了IRE1A的对NASH起到促进作用，并且，这种在CD饮食中并没有表现出差异，只是在FFC饮食中会出现，所以，也说明IRE1A是诱导出来的，并不是自发形成的。并且抑制了CD68巨噬细胞的集聚,并且这种巨噬细胞来源于单核细胞，并且血浆中的促炎因子表达也因为IRE1A的抑制受到影响。
加抑制剂，作者觉得不过瘾，又晚上高达上的条敲老鼠，鼠哥今年注定多灾。作了上述的实验，得出一致结论。
作者进一步看了看增加的EV来源于哪里，在鼠体内通过腺病毒过表达IRE1A得出上述一致结论，并且对外泌体大小没有影响，通过与肝细胞特异性共定位发现外泌体来源于肝细胞。使用ROSAmT/mg小鼠。这些小鼠表达一个细胞膜靶向的双色荧光Cre报告等位基因，该等位基因在Cremediated切除前表达膜靶向串联二聚体番茄(Mt)，在切除后表达膜靶向绿色荧光蛋白(Mg)。经AAV8-TBG-Cre处理后，表达Cre重组酶的肝细胞有细胞膜定位的EGFP荧光，只有肝细胞来源的EVs才有绿色荧光。在给予AdIRE1A或ADB-Gal后，纳米流式细胞术显示转Ire1a基因的小鼠的EVS总数显著增加(图3H)。这一增加是由于肝细胞释放EVS所致，在转Ire1a基因的小鼠中EGFP阳性EVS的增加就证明了这一点。不得不说作者这一步做的真是秒~~~~~啊~~~~~~，和我以前的想法不谋而合。
作者进一步看了看过表达IRE1A对巨噬细胞的作用。发现过表达IRE1A对肝内巨噬细胞的聚集具有显著的促进作用，并且这种巨噬细胞来源于单核细胞，强调了巨噬细胞在NASH形成中的重要性，并且M2型的MDSC和Treg减少。
紧接着作者推测是不是外泌体在这里面起到了作用，然后，用不同处理的外泌体给予小鼠注射，发现很快被肝脏摄取，并且肝内单核细胞来源的局势细胞明显增多，血浆细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-10水平保持不变(图4E-G)，表明EV在肝脏微环境中吸引单核细胞来源的巨噬细胞的作用缺乏系统性炎症。然后看了看单个核细胞的迁移，发现过表达IRE1A的外泌体对迁移有促进作用，以此证明，外泌体促进了单核细胞的趋化。
作者基本上要研究的表型基本上做完了，紧接着，不知道为何作者又做回了IRE1A促进外泌体释放的机制上来了，促炎的表型作了，但是没有解释机制啊亲，你不说明白一点吗？况且这里面有些疑问为什么炎性因子在巨噬细胞招募以后并没有增多？
因为作者在文章开始就介绍了脂毒性EVS的释放依赖于神经酰胺的从头合成，作者看了看IRE1A过表达后脂质代谢变化，从头合成神经酰胺的限速步骤是由丝氨酸棕榈酰基转移酶(SPT)催化的3-酮精氨酸的形成。在人和小鼠中，SPT由3个平行亚基Sptlc1、Sptlc2或Sptlc3中的2个组成，其中Sptlc1和Sptlc2在肝脏中表达，为了进一步研究IRE1A对SPT的遗传调控，我们将重点放在XBP1上。在计算机分析中，确定了Sptlc1和Sptlc2启动子区域中假定的XBP1结合位点的存在，最终确定了Sptlc1和Sptlc2在肝脏中以IRE1A-XBP1依赖的方式表达增加，从而导致肝脏鞘脂的增加。
既然从头合成神经酰胺这么重要，那么办了他，会改善NASH吗？通过给小鼠注射一种SPT的药理抑制剂myriocin来实现这一点，这里对照为什么加了NAOH,好奇怪啊！
动物做完了，一篇高大上的研究，怎么能缺少临床样本，那么整上。在鼠哥身上IRE1A，在人身上有个同源的就是SPTLC1，熟悉的配方，熟悉的操作，再次验证。
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