1材料与方法
1. 1实验动物
C57BL/6J雄鼠小鼠(4周龄)17只,SPF级。饲养于清洁级环境,实验期间所有小鼠均可以自由饮水、摄食,明暗周期为12h/12h(8:00—20:00),室温21~23℃,湿度50%~55%。适应性饲养1周。
1. 2仪器
小动物运动轨迹跟踪系统visutrack(购自上海欣软信息科技有限公司)。高架十字迷宫实验设备,睡眠剥夺箱,自制(长×宽×高为60cm×40cm×30cm),中央固定一直径30mm平台。
1.3模型建立
将17只雄性小鼠随机分为对照组7只、长期精神紧张刺激(LTMS)组10只。LTMS组单笼饲养。对照组7只一笼饲养,正常饲养,每周测定摄食量,刺激实验之后进行行为学实验。对LTMS组小鼠采用每天随机时间进行猫惊吓3h、睡眠剥夺12h两种刺激,连续21d。睡眠剥夺箱使用60cm×40cm×30cm水箱,水面深度足够淹没小鼠,在中央放置直径30mm圆台并高出水面0.5cm,在水箱上方放置有鼠粮的铁网,以确保小鼠的食物供给。猫吓操作在直径1.2米的旷场中,将装有单只小鼠的铁笼放在中央,吸引猫对小鼠惊吓,为确保猫在长期实验中的兴趣,实验前禁食并不定期给予活鼠奖励。
1.4高架十字迷宫实验
高架十字迷宫由开放臂(30cm×5cm)、闭合臂(30cm×5cm×15cm)和两臂汇合的中央区(5cm×5cm)组成,距地面50cm。根据实验,于模型刺激21d测试,将小鼠放在中央区,面对开臂方向,观察动物在开臂和闭臂中的活动情况,实验在暗光、安静下进行,观察5min,记录小鼠进入开放臂次数、开放臂停留时间、进入闭合臂次数和闭合臂停留时间。
1. 5统计学方法
所有实验数据均以(x珋±s)表示,采用SPSS19.0统计软件进行独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义
2实验结果
高架十字迷宫实验中,LTMS组小鼠闭合臂停留时间明显延长,差异具有极显著性(P<0.01),开臂进入次数占比次数减少,差异具有显著性(P<0.05)。
3讨论
高架十字迷宫实验中,小鼠在与外界环境相通的开臂中会有一定的新奇性和探索欲望,小鼠由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动,但出于好奇心和探究性又会在开臂中活动。焦虑抑郁水平高的小鼠会退缩到闭臂中,反之对开臂的探究次数则增多。
本研究结果显示,LTMS组小鼠进入开臂的次数比例显著下降,且在闭臂时间显著增加,提示产生焦虑行为。综上所述,长期精神紧张刺激模型表现出的行为绝望、活动能力下降、兴趣丧失和焦虑与抑郁症临床表现相似,且结合孤养模拟了抑郁症发病的常见因素,成功地建立了符合表面效度的小鼠抑郁模型。