游离DNA如何提取

BIOG产品特点

◎操作简便快速,可在半小时内获得理想的DNA;

◎提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9;

◎产量更高,较国内同类产品高出20%;

◎可用于中量(0.5-1.5mL)血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等液体样本中游离DNA的提取;

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。

BIOG操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、15mL离心管。

2. 取出洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液A:31.5mL加入13.5mL无水乙醇,混匀;63mL加入27mL无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液B:13.5mL加入31.5mL无水乙醇,混匀;27mL加入63mL无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。

3. 取15mL离心管(自备),加入1500μL样本,30μLDNA Carrier混合均匀,加入1500μL 裂解液及150μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。

4. 加入6000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内,将4590μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,8,000 rpm离心2分钟,弃收集管内废液;

6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余4590μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。

7. 将吸附柱放回收集管内,加3750μL 洗涤液A至吸附柱内,8,000 rpm离心2分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,加3750μL 洗涤液B至吸附柱内,静置2 分钟,8,000 rpm离心1 分钟,弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内,8,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的15 mL收集管内,加入70μL 洗脱液(注意将洗脱液均匀加在吸附膜的中间和四周),静置3 分钟,8,000 rpm离心3 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。

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