今天的实验又是大大大大大大大大失败。
为了减小DMSO的毒性,我把溶解好的R直接加到培养基里面,结果给板子换液的时候魔怔了,给对照组和溶剂组都换了有R的培养基,换到第二块板子才反应过来,这时候第二块板子已经加了一排了,于是我把这一排标记为R组,原来标记R组的那一排改成对照组,第一块板子把前两排对照组和溶剂组的含R培养基换成不含R的,原来标记的分组没有改。然后半小时后加M刺激,我又魔怔了,给第一块板子第一排的空白对照组加了M,于是不得已,我又把这一排换成M组,原来第二排是M组的改成空白对照组。于是这样两轮下来,第一块板子原本对照组、溶剂组、保护组的顺序从1、2、3变成了2、1、3,第二块板子则变成了3、2、1。
今天提蛋白和提RNA的时候我应该特别提醒自己不要搞错分组了的,但是还是有可能给我搞错了。因为今天跑qPCR,趋势十分好看,三组三组表达变化非常统一,然而这个完美好看的趋势完全反了,IL-1B的表达居然是保护组三组最高,溶剂组变低,这不是S基因应该有的趋势吗(╯‵□′)╯︵┻━┻所以我严重怀疑我提RNA的时候把溶剂组和保护组给搞反了……绝望啊QAQ
我决定明天去摸个M刺激的条件以及CCK-8……做个时间梯度和浓度梯度
呜呜呜,好心累QAQ,什么时候是个头。希望明天的蛋白不要让我太失望QAQ
未来几天的实验安排:
时间点:0、2、4、8、12、16、24、48、72
第一天:随便什么时候铺板,每个板铺十个孔,100/200都做一个孔
第二天:早上十点(72h)
第三天:早上十点(48h)
第四天:早上十点(24h);下午18:00(16h)
第五天:早上9点(12h,板2);早上十点收第一块板;13:00(8h);17:00(4h);19:00(2h);21:00收板(板2)。
因为要养3天,所以建议接种3*10^5个
明天:WB,跑两块胶,一块跑今天提的9个蛋白,跑S/A/内参三个蛋白。另一块跑摸CC浓度的胶,加样之前根据上一次内参条带的浓度加。