fastqc结果判读(2018-05-25)

转自 https://blog.csdn.net/gateswell/article/details/78858579


使用的是raw date数据,数据质量还是比较好的,不过要进一步用还是需要过滤。

拿到原始数据后我们采用fastqC程序进行质控,看原始数据质量情况,fastqC会生成一个html结果报告,根据图形化界面,我们可以判断下机数据情况是否符合分析要求,fastqC总结如下:

FastqC有3种结果:绿色代表PASS;黄色代表WARN;红色代表FAIL。

当出现黄色时说明需要查看结果。

Basic statistics是该fastq一些基本信息,主要有

数据基本信息

Filename:文件名

File type: 文件类型

Encoding:测序平台的版本和相应的编码版本号,用于计算Phred反推error P时用

Total Sequences: 输入文本的reads的数量

Sequence length: 测序长度

%GC: GC含量,表示整体序列的GC含量,由于二代测序GC偏好性高,且深度越高,GC含量会越高。

数据质量

(最主要看得数据信息)

横轴为read长度,纵轴为质量得分,Q = -10*log10(error P)。

柱状表示该位置所有序列的测序质量的统计,柱状是25%~75%区间质量分布,error bar是10%~90%区间质量分布,蓝线表示平均数。一般要求所有位置的10%分位数大于20,即大于最多允许该位置10%的序列低于Q20。当任何碱基质量低于10,或者任何中位数低于25报WARN,需注意;当任何碱基质量低于5或者任何中位数低于20报FAIL。这个结果相对来说还是比较好的。


tail测序情况

每个tail测序情况,横轴表示碱基位置,纵轴表示tail的index编号,这个图主要是为了防止在测序过程中某些tail受到不可控因素的影响而出现测序质量偏低,蓝色表示测序质量很高,暖色表示测序质量不高。

当某些tail出现暖色,在后续的分析种把该tail测序结果全部去除。

横轴表示Q值,纵轴表示每个值对应的read数目,当测序结果主要集中在高分中,证明测序质量良好。

横轴为碱基长度分布,纵轴表示百分比,图中4条线分别代表A,C,T,G在每个位置上的平均含量。由于测序平台及测序长度不同,以及测序仪开始状态不稳定经常出现前后波动情况。

横轴表示GC含量,纵轴表示不同GC含量对应的read数,蓝色为程序根据经验分布给出的理论值,红色是真实值,当红色出现双峰是表示混入了其他DNA序列。

当出现测序仪不能分辨的碱基时会产生N,横轴为碱基分布,纵轴为N比率,当任一位置N的比率超过5%报WARN,超过20%报FAIL。

理论上每次测序仪测出的read长度时一致的,但是由于建库等因素通常会导致一些小片段,如果报FAIL,表明此次测序过程中产生的数据不可信。

统计序列完全一致的reads的频率,横轴表示重复的次数,纵轴表示重复的reads的数目。一般测序深度越高,越容易产生一定程度的重复序列。

当有某个序列大量出现时,超过总reads数的0.1%时报WARN,超过1%时报FAIL。

横轴表示碱基位置,纵轴表示百分比。当fastqc分析时没有选择参数-a adapter list时,默认使用图例中的4种通用adapter序列进行统计。若有adapter残留,后续必须去接头。

重复短序列出现的次数,这个是没有经过clean的数据。

具体可像原文所说,查看具体信息:http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/Help/

最后编辑于
©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 215,723评论 6 498
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 92,003评论 3 391
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 161,512评论 0 351
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 57,825评论 1 290
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 66,874评论 6 388
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 50,841评论 1 295
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 39,812评论 3 416
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 38,582评论 0 271
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,033评论 1 308
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,309评论 2 331
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,450评论 1 345
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,158评论 5 341
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 40,789评论 3 325
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,409评论 0 21
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 32,609评论 1 268
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 47,440评论 2 368
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,357评论 2 352

推荐阅读更多精彩内容