明天早上实验室的苗师姐要讲文献了，看她的状态准备的还是蛮好的，饶有兴致地给我们讲了一遍，我也就饶有兴致地成为了她的第一个听众。她讲的是今年九月份发在Science上的一篇名为CRISPR-mediatedliveimaging of genome editing and transcription的文章，绝对的技术流。
全文主要围绕他们的一项新工具展开，这个工具由去除了切割DNA功能的CRISPR-Cas9系统中的guideRNA上带有FISH荧光的碱基组成，他们将这样一个复合体导入到细胞中，用于活体细胞的FISH观察。这项工具比直接使用Cas9蛋白与荧光蛋白的融合体做标记更可靠，因为Cas9蛋白上具有核定位信号NLS,细胞核的很多地方都会有，信噪比太大。
依据这项工具他们拓展出一些可靠的应用方式。首先，他们将这个工具转入到带有正常CRISPR系统并含有带蛋白标记的53BP1的细胞中，该工具的target定位在CRISPR的target上游的100kb处,如此该工具就起到了活体定位该CRISPR target位点的作用。而53BP1蛋白则是可以被招募到DNA出现DSB的位点辅助双链修复的蛋白，因此他们在活体的细胞中看到了被CRISPR作用的位点（有该工具指示）53BP1蛋白的信号时亮时灭的现象。此外，因为染色体是成对存在的，他还顺便观察了同源序列的位置配对，通过荧光距离展示，感觉这个有点牵强。
总是“该工具”地称呼她也不是事儿，我就叫她fRNP-dCas9吧。第二个拓展中，他们在一个细胞中转入了两个位点不同、荧光颜色不同的fRNP-dCas9系统，意在活体细胞中观察两个DSB的重组修复。这个同样感觉有点牵强。
还有一个有趣的拓展就是他们同时将同样原理的可以和目标RNA结合的Cas13d系统（fRNP-dCas13d）连同fRNP-dCas9工具一同植入到细胞中，这两个系统定位在了相同的序列位点，然后通过荧光显微镜在进行有丝分裂的细胞中观察到了该位点基因的转录。
总之，我感觉这篇文章很有趣，但是在植物种运用这个技术不太容易，而且目前还不能体会到她在植物学研究中的应用价值有多么大。
太气人了，没赶上日更，想砸电脑，想拽网线，想。。。。。。呼呼，md，睡觉
