操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、1.5mL 离心管。
2. 取出洗涤液,按以下操作:
a) 洗涤液 A:21mL 加入 9mL 无水乙醇;42mL 加入 18mL 无水乙醇,混匀。
b) 洗涤液 B:9mL 加入 21mL 无水乙醇;18mL 加入 42mL 无水乙醇,混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取 1.5mL 离心管,加入 200μL 外泌体样本,再加入 200μL 裂解液及 20μL 消化液,漩涡震荡 10 秒,充分混匀,65℃水浴 10 分钟。
4. 加入 0.9mL 无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内,将 700μL 上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液;将剩余溶液转移至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。
6. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。
8. 按每份样本 40μL 取洗脱液(如 10 份提取样本,即取 400μL 洗脱液),放置于灭菌 1.5mL 离心管,65℃预热。
9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入上述预热的 40μL 洗脱液,静置 3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液。
11. -20℃保存,或直接用于下一步实验。
注意事项
1. 实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用超纯水。
2. 如样本量不足 200μL,请用 0.85% 生理盐水补至 200μL。