做生物基础科研研究的同学肯定都听过CRISPR-Cas9 系统的大名，你对这独领风骚的系统了解多少呢？ 快来随我一起学习一下吧 小郭叨叨叨：最近将要开始使用CRISPR-Ca...
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CRISPR Cas9知识储备第一弹：简介 -
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@冻春卷 谢谢春卷师姐，学到了很多😊😊
CRISPR-Cas9基因编辑3--sgRNA-Cas9质粒构建
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
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@冻春卷 师姐，我还有一个问题，之前我以为敲除完一个蛋白，从基因层面和蛋白层面都验证了后就算完成了，后来看了您的文章，发现还需要验证是否有off target，以及核型分析。我想问一下1我去off target网站预测几率最高的十个脱靶位点然后一一设计引物去测序验证，这样是否可以基本算完成第一步，2核型分析是什么呀，我应该怎么做，送公司去检测吗，3是否做完这两步就可以确保我这个蛋白敲除成功了？🤔
CRISPR-Cas9基因编辑3--sgRNA-Cas9质粒构建
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@冻春卷 我是帮我一个师兄问的，之前有一篇文献使用这个细胞成功敲除了蛋白，然后师兄就直接问那个作者了，那个作者说他们的细胞能从单细胞状态长起来，所以师兄就直接去要了他们实验室的细胞来做。我感觉这个细胞的异质性很大（不知道这个词对不对），不同实验室养出来的不太一样，我们实验室需要提前孵育明胶才能让那个细胞很好地生长，但是他们实验室都不需要明胶，haha。我当时想了两个办法，第一是使用饲养层细胞，因为我之前做过单抗，当时在使用sp2/0杂交瘤细胞亚克隆的时候有预先添加饲养层细胞这一步，这样可以让单细胞长得更快更好，可能就和你们干细胞使用的rock inhibitor和cloneR类似吧，第二个方法就是将100个左右的细胞铺到小皿里面，这样有可能长起来，长成类似单菌落这种细胞形态后再单独消化再亚克这样子，亚克也是让它超过一个细胞去铺，只要能在第一步确定这是单细胞长起来的克隆就没事。当然这都是想想😜
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谢谢春卷师姐
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春卷师姐，你好，我是做鸡的一个癌细胞的crispr cas9，这个细胞正常情况在单细胞状态下很难生长，所以想问问师姐有没有什么方法在铺到九十六孔板后能让这种单细胞长起来。看您之前的文章提到了一个ROCK inhibitor，不知道加了有用吗？期待您的回复
CRISPR-Cas9基因编辑3--sgRNA-Cas9质粒构建
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