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  • 可以对比一下BIOG的操作:1.请自行准备:无水乙醇、15mL离心管。
    2.取出洗涤液,按以下操作:
    a) 洗涤液A:31.5mL加入13.5mL无水乙醇;63mL加入27mL无水乙醇。
    b) 洗涤液B:13.5mL加入31.5mL无水乙醇;27mL加入63mL无水乙醇。
    c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
    3.取15mL离心管,加入1500μL样本,30μLDNA Carrier混合均匀,加入1500μL 裂解液及150μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。
    4.加入6000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
    5.将吸附柱放入收集管内,将4590μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,5,000 rpm 离心2分钟,弃收集管内废液;
    6.将吸附柱放回收集管内,将剩余4590μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。
    7.将吸附柱放回收集管内,加3750μL 洗涤液A至吸附柱内,5,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
    8.将吸附柱放回收集管内,加3750μL 洗涤液B至吸附柱内,5,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
    9.将吸附柱放回收集管内,5,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
    10.取出吸附柱,放入新的15 mL离心管内,加入250-400μL 洗脱液,静置3 分钟,5,000 rpm离心3 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。如需浓缩核酸,则可继续进行后续步骤。
    11.于洗脱液中加入800ul无水乙醇,轻轻颠倒混匀,5,000 rpm 离心5分钟,弃上清。
    12.开盖室温放置5min,待乙醇挥发后,加入30-50ul洗脱液溶解核酸。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

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    2.过夜培养。
    B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染):
    1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA,参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。
    2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔, 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。
    3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。注意: DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。

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