Figure 1 Sour 通过神经减轻小鼠的肝脏 IRI

1. 验证酸刺激是否减轻肝IRI损伤建立肝IRI模型，给予酸刺激（如柠檬酸），检测肝组织病理（HE/TUNEL）、血清ALT/AST、炎症因子（IL-6、TNF-α）。酸刺激组肝损伤减轻（组织坏死↓、凋亡↓），ALT/AST、IL-6、TNF-α水平降低。酸刺激通过降低pH值直接缓解肝损伤。

2. 排除pH值单独作用使用pH相似的盐酸（HCl）处理IRI模型。HCl组与柠檬酸组效果相似，肝损伤减轻。保护作用源于低pH环境，非特定酸根离子。

3. 验证神经系统是否介导保护作用使用局部麻醉剂丁卡因阻断神经传导后，再给予酸刺激。丁卡因组酸刺激的保护作用消失（ALT/AST、炎症因子恢复至IRI高水平）。酸刺激依赖神经信号传导。

4. 明确味觉感受是否必需管饲柠檬酸（避开口腔味觉刺激） vs.口服柠檬酸。管饲组无保护作用（ALT/AST、炎症因子未降低），口服组有效。需通过口腔味觉神经元激活神经通路。

5. 探究大脑神经元激活免疫荧光检测酸刺激后脑区（VPM核团）神经元标志物c-Fos表达。酸刺激组VPM区c-Fos表达↑。酸味信号通过味觉通路激活中枢神经元。

6. 阻断中枢神经信号向VPM核团注射NMDAR拮抗剂（阻断突触传递），再给予酸刺激。NMDAR拮抗剂组酸刺激的保护作用消失（肝损伤指标与对照组无差异）。酸味信号需通过NMDAR介导的中枢神经通路发挥作用。

Figure 2 Neuronal infected by H129 distribution in brain and liver.

这里面涉及到顺向的病毒追踪技术，在后面进行介绍。

Figure 3 酸刺激降低小鼠 IRI 期间神经细胞中 Fam19a2 表达的增加

我在心脏中怎么没有发现神经元细胞？？？

C-D 找到造模上调top，给药后下调top，这个图画的不错。

H-J 神经炎症研究的常规刺激物？？筛选

Figure 4 Fam19a2 敲除或敲除可减少小鼠的肝缺血再灌注损伤

A 病毒类型：腺相关病毒（AAV，如AAV9或AAVrg），具有高效神经元转导和低免疫原性。-2周开始表达

启动子：hSyn（人突触蛋白启动子），特异性在神经元中驱动表达，避免胶质细胞干扰。

F KO小鼠

Figure 5 TAFA2 增加 IRI 中巨噬细胞的比例并刺激炎性细胞因子的产生。

Figure 6  TAFA2 与巨噬细胞表面的 CCR2 受体相互作用 先找受体后做刺激后的转录组--考虑到了CCR2，我是否考虑到其他配体？

1. **IP-MS筛选**：用FLAG-TAFA2免疫沉淀BMDM裂解物，质谱鉴定出CCR2为显著富集的受体候选（图6A/表S5）。有

2. **流式结合验证**：FLAG-TAFA2仅结合野生型巨噬细胞，不结合CCR2 KO细胞，证实CCR2是TAFA2受体（图6B）。 --无

3. **功能激活检测**：TAFA2在野生型巨噬细胞中诱导炎症因子（Il1α/Il1β/Il6/Tnfα），CCR2 KO中无此效应（图6C）。有  

4. **肝脏IRI损伤评估**：CCR2 KO小鼠较野生型肝坏死面积显著减少（图6D）。 无

5. **细胞死亡分析**：CCR2 KO小鼠肝细胞凋亡减少（图6E）。 无

6. **巨噬细胞浸润检测**：CCR2 KO小鼠肝脏中巨噬细胞浸润降低（图6F）。 无

7. **血清指标测定**：CCR2 KO小鼠血清ALT/AST及炎症因子（IL-6/TNF-α）水平下降（图6G）。

先补充细胞实验进行替代-受体敲除

Figure 7 酸刺激会减弱人类肝切除术期间的肝脏 IRI

神经环路追踪：

顺行神经环路追踪

HSV1病毒H129-hUbC-HB-EGFP 是一种经过基因改造的 1型单纯疱疹病毒（HSV-1），主要用于神经科学研究，特别是 神经环路追踪（Neural Circuit Tracing）。-主要是顺行神经环路追踪。

1. H129病毒通过顺行跨突触传播，从初始感染的神经元（如注射部位）跨越突触感染下游连接的神经元，从而标记整个神经通路。

2. HSV-1的 H129株 是神经科学中常用的病毒株，具有 顺行跨突触传播（anterograde trans-synaptic spread） 的特性，即从感染的神经元胞体沿轴突向突触后神经元传播。

3. hUbC：人泛素C（human Ubiquitin C）启动子，驱动外源基因（如HB-EGFP）的 持续高表达，避免基因沉默。

4. HB-EGFP：Heart-break EGFP，一种经过优化的增强型绿色荧光蛋白（EGFP），具有更强的荧光信号和稳定性，用于标记感染的细胞。

逆行神经环路追踪

待补充