Investigating the Impact of Dimer Interface Mutations on Norrin’s Secretion and Norrin/β-Catenin Pathway Activation二聚体界面突变对Norrin分泌和Norrin/β-Catenin通路激活的影响
目的：本研究旨在调查位于二聚体界面的21个NDP突变的影响，重点研究它们对蛋白质组装、分泌效率和Norrin/β-catenin信号通路激活的潜在影响。
方法：采用Western blot分析突变的表达水平、分泌效率和蛋白质组装。在HEK293STF细胞中测试了突变体过表达或突变蛋白上清液孵育后Norrin/β-catenin信号通路的激活能力。突变型norrin和野生型（WT）FZD4在HeLa细胞中过表达，以观察它们的共定位。在HeLa细胞中进行免疫荧光染色以分析Norrin的亚细胞定位，并使用选择性钩保留（RUSH）法动态观察WT和突变Norrin的分泌过程。
结果：在所有评估中，四个突变体（A63S、E66K、H68P和L103Q）与野生型没有显著差异。其他17个突变体表现出异常，包括蛋白质组装不足、分泌减少、无法与细胞膜上的FZD4结合以及激活Norrin/β-catenin信号通路的能力降低。RUSH检测显示内质网（ER）退出延迟和高尔基体运输受损。
结论：Norrin二聚体界面的突变可能导致蛋白质组装异常、无法与FZD4结合和分泌减少，从而导致Norrin/β-catenin信号传导受损。我们的研究结果揭示了家族性渗出性玻璃体视网膜病变（FEVR）或Norrie病中很大一部分NDP基因突变背后的致病机制.
其中DNA转染用Entranster-H4000产品转染实现。
