很多同学在进行WB实验时，常常会咨询用什么来稀释一抗、二抗，传统的方法里一般是使用TBST、PBST、脱脂奶粉等作为抗体稀释液，但在实际应用中还存在些许问题或者不适用的场景：
TBST：仅使用TBST来稀释抗体的话，蛋白检测时会发现结果中时常出现很多杂带或背景较深的情况，可能是因为不含有封闭成分，有时抗体与蛋白质结合不稳定，位点就会暴露，增加了非特异性结合的发生。
PBST：PBST的成分为磷酸盐缓冲液加Tween-20，因此不能用来稀释碱性磷酸酶（AP）标记的抗体，磷酸盐会干扰碱性磷酸酶结合的抗体，并增加磷酸特异性抗体的背景信号，同时也不可以用来稀释含AP标记的二抗。
脱脂奶粉：脱脂奶粉一般以3~5%(w/v)浓度溶解在TBST溶液中来作为抗体稀释液，在某些实验中比只含有TBST的抗体稀释液会取得更好的效果，因为这些成分可以起到稳定蛋白质结构和减少非特异性结合的作用。但是由于其本身成分的原因，脱脂奶粉不能用于磷酸化蛋白的检测或者生物素检测系统，而且其保存时间短，容易变质不建议用来稀释昂贵的抗体。
然而，很多研究者在实验初期并不了解不同抗体稀释液所适用的场景或短板，在面对选择何种抗体稀释液时就会陷入选择困难。根据我们实验室的经验，大家可以选择市面上已经做的比较成熟并且可以规避上述传统封闭液缺点的抗体稀释液，比如BIOG的通用型抗体稀释液。从成分上来看，BIOG抗体稀释液不含有脱脂奶粉，可应用于磷酸化蛋白和生物素系统的检测，同时也没有磷酸盐成分，不会抑制碱性磷酸酶标记一抗或二抗活性。此外，区别于很多市售的一些抗体稀释液，BIOG抗体稀释液中不含叠氮钠成分，而有些生物试剂厂家为了防止抗体变质往往会在稀释液中添加叠氮钠，这是一种防腐剂，可使抗体使用时间更长，但其具有毒性，并且不能用来稀释辣根过氧化酶 (HRP)标记的抗体，因为其氨基会与HRP的辅基氯化血红素结合，从而抑制酶的活性。从性能上来看，我们通过比较使用TBST稀释和使用BIOG抗体稀释液的蛋白条带检测结果，发现在未封闭的实验条件下，用BIOG抗体稀释液后能取得较好的封闭和检测效果，目的蛋白条带背景也更加清晰，可能是得益于其中含有的化学分子封闭配方，可高效封闭非特异性吸附位点，从而较大程度减少了背景显色，这也为研究者省去了封闭的实验步骤，可以说十分便利了。建议研究者以此类产品性能为选择标准来选择合适的抗体稀释液，可以起到事半功倍的效果！
