Part6：DFI Immunological safety of DFI treatment
Para1:
为评估DFI治疗的持续效应与安全性，老年小鼠接受为期28天的DFI或对照mRNA-LNPs处理，随后停药28天并进行观测 (Supplementary Fig.6a)。结果显示，与对照组Luc相比，给药期间外周血中TCR切除环水平升高，提示胸腺输出功能增强；停药后该指标恢复至基线，表明DFI的免疫增强作用具有可逆性(Supplementary Fig. 6b,c)。同时，mRNA本身的短半衰期特性以及单次给药后胸腺细胞Rag2表达的快速回落(Fig. 2f)，共同印证了该疗法效果的瞬时与可控特征。
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- Supplementary Fig. 6A：实验流程图：老年小鼠接受为期28天的DFI或Luc对照mRNA-LNP治疗，随后进行28天洗脱期（停药期）
- Supplementary Fig. 6B：治疗第28天各组胸腺重量（每组n=5），组间比较
- Supplementary Fig. 6C：外周血中信号连接T细胞受体切除环（sjTREC）的定量分析，组间比较
Para2:
通过对脾脏进行全组织空间转录组分析发现，尽管停药后胸腺输出新T细胞的功能已开始下降，但在停止给药28天后，脾脏内的T细胞和树突状细胞数量仍高于治疗前基线水平(Supplementary Fig. 6d–g)，提示DFI的免疫重塑效应具有一定持续性。然而，与之前注射DFI后立刻进行疫苗接种不同，如果在停药四周后再进行疫苗接种，此前观察到的有益效应——包括疫苗特异性T细胞增加、耗竭样细胞减少以及更健康的免疫细胞组成——均不再显现(Supplementary Fig. 6h–k)。这表明，DFI所实现的免疫增强作用主要依赖于持续给药，并在治疗停止后逐渐消退。
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- Supplementary Fig. 6D-F：（D）脾脏结构的STARmap投影图；（E）标志基因表达量热图；（F）已注释免疫亚群的空间分布。
- Supplementary Fig. 6G：脾脏总T细胞及DC的数量，组间比较。
- Supplementary Fig. 6H：DFI治疗后进行OVA蛋白疫苗接种的实验流程图。
- Supplementary Fig. 6I-K：SIINFEKL-H-2Kᵇ四聚体结合CD8⁺ T细胞的占比、耗竭表型CD62L⁻PD-1hi CD8⁺ T细胞的占比，以及初始、中枢记忆与效应记忆CD8⁺ T细胞亚群的占比，组间比较。
