Q1: 一个孔中应接种多少个细胞？
A1: 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl
培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl
培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
Q2: 能否用384孔板进行试验
A2:可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8体积太少，可以先将CCK-8溶液稀释1倍，然后加入培养基体积20%的量。
Q3: 能否用24孔板进行试验
A3: 可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。
Q4: 酚红会影响检测吗？
A4: 不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
Q5:CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性
A5: 有。然而，请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此结果可能不同。
Q6: CCK-8能否检测细菌细胞？
A6: 可以检测E.coli，但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。
Q7: CCK-8稳定吗？
A7:CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存，我们推荐-20℃的储藏条件。
Q8: 如果没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他滤光片？
A8: 还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。
Q9: 如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？
A9: 可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样
Q10: CCK-8是什么颜色？
A10: 应该是粉红色。若颜色不一样，有可能会影响测定。
Q11: CCK-8能否对活细胞进行染色？
A11：不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8)，并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的，因此CCK-8不能对细胞进行染色。
Q12: CCK-8检测溶液对细胞是否有毒？
A12:
CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK-8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力
Q13: 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
A13:有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK8发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450
nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。
Q14: 每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？
A14: 可能会有以下几个原因：1.
当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。2.
有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。3.
每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。
Q15: 如何设定空白对照？
A15: 在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
