(1)15ml菌液(接种40ul菌种),采用四个离心柱进行质粒回收,每管回收80ul,合并为320ul(300ng/ul).
注意总量保持为至少20ug以上,否则很难回收到去内毒素的质粒
(2)5M NaCL(1/20总质粒体系),本体系取16ul的NaCL溶液+1ml预冷后的无水乙醇,上下颠倒混匀,-20℃下,放置10min,12000rpm,4℃,离心13min。倒掉上清。该步骤要小心,不要把白色物质离心丢掉。
(3)用75%的酒精500ul重旋质粒,上下颠倒混匀,12000rpm,5min,4℃条件下离心弃上清,用枪头小心吸净EP管内液体,置于超净台吹干,10-15min。
(4)120ul水振荡,37℃10min,快甩1min。大约可以回收到800ng/ul。