前言
小编最近看到一个文章，该文章从同义突变位点中提取4dtv用来做后续分析，原文见 Genomic Consequences of Long-Term Population Decline in Brown Eared Pheasant ,所以很是好奇是怎么实现的，但文章没有说明怎么实现的，还好通过百度最终找到了破解方法，这里主要参考了大神的博客，博客原链接见从SnpEff注释得到的VCF中过滤4DTV位点
安装环境
（1）java #该软件是Java编写，小编这里用的java-1.8.0
（2）snpEff #上边提到的博主基于该软件编写的提取4DTV脚本
（3）python3以及pysam模块
pysam模块
pip3 install pysam -i https://pypi.tuna.tsinghua.edu.cn/simple
snpEff软件安装
wget https://nchc.dl.sourceforge.net/project/snpeff/snpEff_v4_5covid19_core.zip
unzip snpEff_v4_5covid19_core.zip #解压安装
cd snpEff ; chmod 755 *jar #进入目录，可以看到两个jar执行程序，分别是SnpSift和snpEff，给执行权限
snpEff软件配置
该软件是一个很强大的软件，自带有很多基因组的数据库，小编在此不再介绍，有兴趣可以上官网查看，SnpEff & SnpSift,小编这里带你怎么根据自己有的基因组和gff3文件搭建该基因组的注释数据库，以从NCBI下载下来的苹果基因组和gff文件为例
mkdir -p data/apple
ascp -i ~/asperaweb_id_dsa.openssh -QTr -l200m anonftp@ftp.ncbi.nlm.nih.gov:genomes/all/GCF/002/114/115/GCF_002114115.1_ASM211411v1/GCF_002114115.1_ASM211411v1_genomic.fna.gz ./ #ascp用法见小编关于该工具的博客
ascp -i ~/asperaweb_id_dsa.openssh -QTr -l200m anonftp@ftp.ncbi.nlm.nih.gov:genomes/all/GCF/002/114/115/GCF_002114115.1_ASM211411v1/GCF_002114115.1_ASM211411v1_genomic.gff.gz ./
基因组和gff注释文件下载下来后，解压并命名为sequences.fa和genes.gff，这里命名错误后续会报错
cd ../../
vim snpEff.config,修改配置文件，找到Databases & Genomes，修改如下，注意命名需要严格参照小编的来，apple是上边建立在data数据库里的文件名，后缀必须有.genome
# Databases & Genomes
#Malus_domestica
apple.genome : Malus_domestica
apple.reference : https://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/all/GCF/002/114/115/GCF_002114115.1_ASM211411v1/GCF_002114115.1_ASM211411v1_genomic.fna.gz \ # Genome sequence
https://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/all/GCF/002/114/115/GCF_002114115.1_ASM211411v1/GCF_002114115.1_ASM211411v1_genomic.gff.gz \ # gff3
snpEff自由数据库建立
这里需要较长时间，最好是在后台nohup运行,尤其是比较大的基因组
java -jar snpEff.jar build -gff3 -v apple
