第1策 由疾入型
是表型而非疾病决定研究套路
基础科研的五个恒量要素:疾病、表型、模型、检测方法和分子标志物。
目前基础医学的研究阶段:分子阶段,通过分子之间的相互调控解释背后的作用机制。
了解某一种疾病的所有表型最好的方法:阅读最新综述文章、查询当年国自然立项情况(科学基金网络信息系统)。
表型的三大特征:表型分裂(平行关系)、表型嵌套(因果逻辑)、表型通用(通用属性)。
第2策 化型为模
研究套路来自于文献总结和借鉴;
首先掌握一种疾病有哪些表型,然后再精雕细琢;
模型(model)
疾病和表型共同决定了模型的选择。
细胞是最低等的模型,但是可重复性相对较高,是医学研究中最经典的模型,结果比较稳定之后再做动物研究。
in vitro 体外细胞; ex vivo 活体分离细胞(原代细胞);in vivo(动物);in situ(组织)。
能放在一起完成的实验就一起做。
文献图集可以分成三类:细胞实验、动物实验、人组织标本实验。
细胞实验的目的:功能、分子调控机制(探讨分子关系)。
模型分类:自发性模型;诱发性模型;转基因模型。
PDX模型:人源性组织异种移植 (patient-derivedxenografts )。
获取模型的方法:精读高分文献(硕博论文)。
建立文件夹,积累并分类实验方法。
第3策 法标两立
法
临床医生做科研需要具备科学家的思维。
表型与assay之间存在一对多的固定对应关系(一个结论需要多个实验相互佐证才可靠)。
看到表型的一瞬间就应该想到做什么实验(达到条件反射的程度,此有利于快速阅读文章)。
熟练掌握常用实验的目的、原理和操作步骤,学会实验结果的分析方法(达到给你原始数据就可以做出文章里的图表的程度);
若实验分组为空白组、阴性对照组、实验组,应立即想到用oneway anova做显著性分析;
必须掌握的实验技术:
- qPCR
- Westernblot(几乎每一篇医学文献都用到),蛋白是生命体执行功能的基本单位。
- 分子相互作用实验(机制研究的重点),如荧光素酶报告基因实验,
- 基因操作工具(都可以买到);
细胞实验:没有状态好的细胞,实验结果的可靠性、重复性就差了一大截;
标
其中一部分就是特异性表达的一些蛋白,其中大部分是膜蛋白,其便于检测和分选;
分类1
一类特异性代表表型特征,伴随表型出现。
另一类跟通路相关,伴随机制出现。
分类2
临床疾病标志物(如:AFP、CEA)。
基础科研标志物(如:CD34、Nestin)。