是抗体“瞄错了”
每次做WB，marker亮得离谱，甚至盖过目标条带😵💫
👉直接原因其实很简单：抗体和marker的非特异性结合太强了！
这时候别只怪显影，其实问题多半出在这两步👇
1️⃣ 封闭不够,marker上的非特异位点没被屏蔽住
2️⃣ 抗体孵育稀释液选择不对，浓度太高、时间太久，非特异结合统统放大了
3️⃣ 特殊情况样品中含有一些特殊物质，通过封闭液或者稀释液里面的大分子蛋白交联到一起了（这个是最棘手的情况了）
🔧优化建议：
✔ 降低抗体稀释倍数（尤其是一抗）
✔ 适当提高样品的上样量，拉高信噪比
✔ 搭配艾克的低背景封闭液和抗体稀释液（一二抗都需要关注）提前“封住”marker干扰
（目前解决了几乎所有遇到的Marker曝光的问题）
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