seahorse实验


1. ECAR(Extracellular Acidification Rate): 细胞外酸化率

①基础值:细胞的非糖酵解产酸值

②第一次加药(饱和浓度的葡萄糖):实验第一次加入的药物是饱和浓度的葡萄糖,细胞通过糖酵解途径利用该葡萄糖并将其分解为 pyruvate,产生 ATP、NADH、水和质子。质子释放入胞外环境引起 ECAR 的迅速升高。

这种由葡萄糖诱导的细胞应答被称为细胞在基础条件下的糖酵解能力

第二次加药(Oligomycin):oligomycin为ATP合酶的抑制剂,可抑制线粒体ATP产生,氧化磷酸化被抑制,此时细胞完全靠糖酵解供氧。增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力。

总的数值代表细胞的最大糖酵解能力。

第三次加药(2-DG):该药通过竞争性结合糖酵解途径的己糖激酶而抑制糖酵解。

此时数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。

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