单细胞测序方法和原理系列:
- 1. 单细胞转录组建库原理:SMART、TargetAmp和10X genomics
- 2. DNA文库构建和Illumina测序化学原理
- 3. 单细胞免疫组库:TCR基因重排原理和TCR测序建库方法
- 4. 单细胞ATAC-seq原理介绍与报告解读
- 5. CITE-seq:同时测细胞表面蛋白和RNA的单细胞测序
1. 文章
LIBRA-seqs全称Linking B cell Receptor to Antigen specificity through sequencing,意思是通过测序将B细胞受体与抗体特异性连接。
这项技术的方法学的文章在2017年发表在cell上。
特点:
2. 方法原理
- 2.1 对抗原加标签
在抗原上连接上PE燃料,用于流式分选,连接上特定DNA条码,用于测序。(这里的抗原就像鱼饵,每种鱼饵可以抓特定的鱼。给鱼饵加上标签,就可以知道抓到的是什么鱼)
- 2.2 把外周血单核细胞与抗原孵育
- 2.3 流式细胞仪分离带荧光的细胞
- 2.4 通过10x仪器,把细胞分离再测序
- 2.5 经过基因重组表达,得到目标抗体
3. LIBRA-seq优点
传统方法:杂交瘤技术和噬菌体展示技术
和传统方法相比,LIBRA-seq具有如下优点:
- 速度快
- 可用于被感染过的,有免疫力的人的外周血
- 一次性得到目标抗原、抗体 轻重链的全场序列
- 可以一次实验筛选多个抗原
- LIBRA-seq得分直接显示了抗体的结合特异性