一,非洲猪瘟荧光PCR抗原检测1、样品的接收-登记2、样品的制备(处理的阳性阳性样品做梯度10倍稀释)。3、制备反应体系,20微升4、用磁珠法提取非瘟核酸5、加入样品6份,做平行组,阴性对照2份,阳性对照2份。6、PCR上机,出结果。
二、药敏试验1、培养基制备(亚硫酸铋琼脂)2、每人1瓶固体培养基 (50mL),均勾倒入3块一次性培养皿,做好标记。3、平板划线(3区划线法)4、用烧灼后的接种环分别挑取营养琼脂上的单菌落,接种到营养琼脂、麦康凯平板,做好标记,37°C育 18-24h。5、药敏试验(7种药敏片)6、菌悬液的制备:在生物安全柜中,准备1只无菌西林瓶,加入 1mL 左右无菌生理盐水,用接种环无菌挑取营养琼脂上的典型单菌落在瓶壁上研磨充分,使菌落与生理盐水充分混合。7、将制备的菌悬液用标准比浊管校正至 0.5麦氏单位,使细菌浓度达到1.5x108CFU/mL..8、接种平板:用无菌棉拭子醮取菌液,在管壁内旋转挤压,去除多余菌液。用拭子涂抹 MH表面,每次旋转平板约 60°,确保接种液涂抹均匀,最后在琼脂平板边缘涂抹一圈。9、贴药物纸片:用记号笔在培养皿背面做好7区分布,标记 1-7,用无菌镊子夹取药敏纸片平放在琼脂并轻压使紧贴于琼脂平板,每次都需要烧镊子。10、将培养基放入温箱37度培养,18-24小时,明天观察试验结果。
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