AC16细胞培养说明
AC16人心肌细胞可以连续传代，并且当在无有丝分裂原的培养基中培养时可以分化。这些细胞可用于研究心肌细胞的发育调控。
01
AC16细胞基本信息
人心肌细胞AC16
名称：AC16人心肌细胞
来源：心脏组织
特性：贴壁生长
形态：成纤维细胞样
支原体：无
推荐传代比例：1:2-1:3
推荐换液频率：3次/周
冻存液：无血清冻存液，液氮储存
规格：1x10^6cells/T25或1mL冻存管
培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
AC16人心肌细胞
完全培养基
02
AC16细胞处理方法
复苏细胞T25瓶
复苏AC16细胞
1.拿到AC16细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，
2.用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置4h，显微镜下观察细胞状态；
培养指南
AC16细胞复苏步骤
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。
第三天换液并检查细胞密度。
AC16细胞传代操作
如果AC16细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
a.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化3 -5min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
AC16细胞冻存步骤
待AC16细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。
2.根据AC16人非小细胞肺癌细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
