PCR,实验入门基础

PCR: polymerase chain reaction

待扩增DNA模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。


PCR实验常用Taq酶,但有的实验需要保真度更高的一些酶。高保真的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通Taq酶的错配率在10-5碱基/循环数,而高保真Taq酶错配率可降到10-6,大大降低了出错的可能性,适合对PCR保真性要求较高的实验,如基因筛选,测序,突变检测等。高保真Taq酶的保真原理是:高保真Taq酶具有3‘-5‘核酸外切酶活性, PCR扩增中如果产生错配碱基,它可以将其切掉,但是也正因为如此,往往扩增效率低一些,而且不宜用TA法克隆。

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