TRANSWELL

!!!


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matigel胶稀释比例:1:6,1:7,1:8
枪头要预冷,matrigel前一天晚上放4°成液态,用预冷的枪头无血清培养基稀释后取70~100ul加入上层小室中
细胞要铺多一点
matrigel:-20°固态,4°液态,室温凝胶状态

  1. 取对数生长期的细胞,常规消化(可以无血清饥饿12~24h,去除血清对cell侵袭能力的影响)

  2. 用无血清培养基重悬细胞,调整细胞密度为(2~5)*10 5/ml
    细胞要多一点
    六孔板其中一个孔消化下来后稀释6倍

  3. 取100ul细胞悬液接种于transwell小室的上室,下室加入600ul含10%FBS 的培养基 (避免小室下面产生气泡)

  1. 培养48h 后取出小室置烧杯内PBS涮洗 。

  2. 吸干上室液体,4%多聚甲醛室温固定10~30min,
    另一24孔板中加入800ul染色液/孔
    涮洗后,吸干上室固定液,移入0.1%结晶紫染色液,室温染色20min (结晶紫:常规工作液浓度0.1%)

  3. 小室用流动水轻轻冲洗浸泡3次进行脱色,烧杯内涮洗

  4. 吸干上室液体,用棉签(棉花扯松一点再擦)轻轻擦掉上室底部膜表面未迁移细胞

  5. 400* 显微镜下随机观察5个视野细胞,并进行照相


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  6. 数据处理:


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十字线划分,4个角再拍一遍

  1. 数据处理


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