血液miRNA提取操作简便吗?

产品特点

◎采用独特的消化技术,去除较大分子的DNA和rRNA, 使miRNA更容易分离提取;

◎采用miRNA富集技术,使血液miRNA聚集起来,使之更容易被核酸纯化膜吸附纯化,大幅提升miRNA的提取效率;

◎操作简便,只需30多分钟即可获得理想的miRNA提取结果。

产品介绍

miRNA分子较小,约19-25个碱基,传统的RNA提取试剂盒提取的是血液总RNA,主要是较大分子的rRNA,对miRNA的提取效果显著不佳。百代生物经较长时间的实验摸索,研发成功了可高效提取血液miRNA的专门试剂盒。BIOG血液miRNA提取试剂盒采用独特的消化配方,先去除较大分子的DNA和rRNA,再使用miRNA富集技术,使血液miRNA聚集起来,使之更容易被核酸纯化膜吸附纯化,与部分同类试剂盒相比,显著提升了miRNA的提取效率。BIOG血液miRNA提取试剂盒各组分经反复优化,操作也非常简便,只需30多分钟即可获得理想的提取结果。

操作步骤

1. 请准备:无水乙醇、PH7.5 PBS溶液、1.5mL RNA-Free离心管、液氮、研钵。

2. 取出洗涤液,按85%比例加入无水乙醇, 1.5mL加入8.5mL无水乙醇,充分混匀。

3. 取1.5mLRNase-free灭菌离心管,加入160μL血液样本,再加入30μL结合液及30μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴12分钟。

4. 加入0.22mL miRNA释放剂 ,充分振荡混匀,室温放置2分钟;

5. 13,000rpm 离心5分钟,将400uL上清液转移到1支新的1.5mL RNA-Free离心管(注意不要吸到管壁和管底的血迹);

6. 向上清中加入5uL miRNA富集剂,再加入300 uL无水乙醇,充分混匀,静置2分钟;

7. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,13,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,静置2分钟,13,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。

9. 重复步骤8。

10. 按每份样本30μL 取洗脱液(如10份提取样本,即取300μL 洗脱液),放置于灭菌RNA-Free离心管,65℃预热。

11. 将吸附柱放回收集管内,13,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的乙醇。

12. 取出吸附柱,放入新的1.5mL RNA-Free离心管,开盖放置2分钟,挥发乙醇。

13. 加入30 μL 预热的洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集miRNA溶液。

注意事项:

1.裂解液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。

2.由于RNA容易降解,提取实验所用器具应除去RNA酶,实验过程中最好戴一次性洁净手套、口罩,提取的RNA溶液可适当加入RNA保护因子(货号:51090,一般50μLRNA溶液加入2μL。)

3.洗涤液加入乙醇后要充分混匀,最好现用现配,每次根据所要提取的样本量计算后适量配制。


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