本教程是利用NCBI数据库进行设计。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
第一步：准备所要设计引物的基因序列
第二步：打开blastn选项
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第三步：找到自己研究的物种，点击序列所属的accession
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第四步：点击‘pick primer’
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第五步：选择参数1、选择产物的长度，一般都是70-150. 2、选择引物跨越外显子
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第六步：等待结果
第七步：选择结果，一般选择前两个引物即可。
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当然，也可以使用其他的软件进行qpcr引物设计，但是要进行特异性验证。
验证方法如下：
第一步：打开ncbi的‘primer-blast’程序
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第二步：将前后引物粘贴进去，修改物种
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第三步：看结果
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显然这个引物不行，扩增出来的产物太多。
