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2.皮肤组织样本收集:
2019年1 - 6月于新疆维吾尔自治区维吾尔医医院收集8例汉族寻常型白癜风患者皮损及非皮损皮肤组织标本,男1例,女7例,年龄10 ~ 25(15.25 ± 5.12)岁,发病年龄9 ~ 18(13.13 ± 2.85)岁。4例为进展期(皮损正在进展或6个月内出现新皮损),4例为稳定期(6个月内皮损大小/数量未增加)。4例皮损组织取自小腿,3例取自前臂,1例来自颈部;8例非皮损组织均取自臀部。所有患者在纳入本研究前3个月以上未接受任何全身或局部治疗。本研究经新疆维吾尔自治区维吾尔医医院伦理委员会批准(伦理审批编号:LCEC[2016]001),所有患者均签署了知情同意书。
3.实时定量PCR验证DEG mRNA的表达:
使用RNAiso-Plus试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司]提取8例白癜风患者皮损及非皮损组织中的总RNA。采用cDNA合成试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司]将RNA逆转录为cDNA。以1 μg cDNA为底物,应用SYBR Green试剂(美国ThermoFisher Scientific公司),在ABI 7300 Real-Time PCR系统(美国Applied Biosystems公司)上行实时定量PCR检测,引物序列见表1。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,用2-∆∆Ct方法计算DEG mRNA的相对表达量,其中∆Ct=目的基因Ct值-内参Ct值,∆∆Ct=白癜风组∆Ct值-对照组∆Ct值。
表1
实时定量PCR中引物序列
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