HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
细胞名称：人肾皮质近曲小管上皮细胞(STR鉴定正确)
细胞简称：HK-2
细胞别称：Hk-2; HK2; Human Kidney-2
产品货号：TCH-C400
种属来源：人
组织来源：肾
细胞形态：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
培养体系：MEM＋10% FBS＋1% P/S
配套培养基货号：TCH-G400
传代比例：1:3-1:4，每2-3天换液一次
传代周期：24-48 h
培养条件：气相：95%空气+5%CO₂，温度：37℃
冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存
质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性
HK-2细胞培养步骤
1. 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2. 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
（1）直接弃去培养容器中的培养上清。用PBS洗涤细胞2次，洗涤后的PBS直接弃去，无需保留。
（2）PBS洗涤培养容器1~2次，收集所有细胞悬液至离心管中，250 g离心4 min。
（3）离心后去除上清。加入2 mL预热的完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。
（4）将细胞按(2.5~4.0) ×10^4个活细胞/cm²接种至适宜的培养容器内。
注意：如未计数，也可按照适宜比例进行传代，首次传代建议按照1：2进行，后续可根据细胞实际生长情况参考说明书传代比例范围灵活调整。
3. 细胞冻存：待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。
（1）消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。
（2）离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。
注意：细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如离心后用冻存液重悬计数，请将细胞放置于4℃冰箱内，以减弱细胞代谢，较好的保持细胞状态。
（3）如使用海星一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80℃冰箱即可完成“一步”冻存。如使用程序冻存液，需将冻存管放入提前预冷的程序降温盒后放入-80℃冰箱。
（4）24小时后可将冻存管转移到液氮进行长期保存。
注意：细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。建议24 h后尽快转移至液氮中。
HK-2细胞常见问题
在培养HK-2细胞的时候，常会出现一些细节问题，不可掉以轻心。以下是小海星为大家准备培养HK-2细胞常见的问题，以及解决方案。
1.出现拉丝
细胞伸出细长的丝有两种情况：
第一种情况是细胞迁移造成的，细胞在培养皿上并不是静态的，也会出现迁移。迁移时细胞的一部分滞留在原处，迁移的过程中会拉出一条细长的丝。这种情况下拉丝的细胞占少数，细胞整体的生长状态是正常的，不用特殊处理。
第二种情况是营养不良，拉丝的细胞占大多数，同时细胞生长缓慢，此时可以提高血清比例（不超过20%）或添加5 ng/mL EGF。
2.形态不对
正常的HK-2呈铺路石状生长，如果细胞呈镰刀状或不规则状（如下图），可能是因为培养环境发生了较大的改变，比如从有血清到无血清的转换，此时换回原来的培养条件细胞可逐渐恢复；如果细胞变得细长，这时候可能是营养不良。
3.出现空泡
空泡问题需要结合生长速度和形态来看：如果生长速度和形态正常，空泡可能是正常的细胞活动，传代后空泡即可减轻。
如果生长较慢，形态异常，空泡可能是自噬行为，可加大血清比例（不超过20%）或更换血清品牌改善细胞状态。
4.生长缓慢
在标准培养条件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3传代条件下，HK-2的传代周期约为3天；
当细胞生长缓慢，一周无法传代时，需要考虑培养基特别是血清是否合适；
选择合适的培养基及血清，同时加大细胞接种密度可以改善；
血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
培养基选择：
HK-2最初建系使用无血清培养，众多文献以及实践证明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的条件下，HK-2也能良好生长。但胎牛血清的质量是关键，胎牛血清品质越高，HK-2状态越好。
若使用无血清培养基培养，需要使用多聚赖氨酸或者明胶包被培养瓶，以促使贴壁。
